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目的： 1.建立D-半乳糖(D-galactose，D-gal)诱导星形胶质细胞体外快速衰老模型，并利用D-半乳糖诱导小鼠衰老模型，分析脑衰老过程中的代谢改变情况。 2.利用衰老的星形胶质细胞建立氧糖剥夺/复灌（OGD/recovery）损伤模型，模拟脑卒中病理进程，并分析肌肽在这个过程中的作用机制。 方法： 1.使用β-半乳糖苷酶染色筛选建模条件，并通过光镜、电镜检查及免疫荧染色进一步检测细胞衰老相关改变。 2.通过MTT比色法与线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)，比较正常与衰老星形胶质细胞线粒体功能与膜电位上的差异。 3.使用RT-PCR与western blot技术，分别从基因与蛋白水平，检测衰老星形胶质细胞内谷氨酰胺合成酶(GS)含量的变化。 4.使用MTT比色法与Hochest33342和PI核荧光双染法，分析衰老星形胶质细胞对谷氨酸兴奋性毒性的耐受程度。 5.通过1H NMR技术分析正常小鼠与D-gal诱导衰老小鼠大脑皮层内主要代谢物质的浓度改变情况，并进一步通过RT-PCR技术，检测相关机制。 6.使用MTT比色法，选择衰老星形胶质细胞急性缺糖缺氧模型条件(4h、8h);进而建立衰老星形胶质细胞氧糖剥夺/复灌24h模型，模拟衰老星形胶质细胞脑卒中过程。 7.在OGD结束后，复灌同时加入不同浓度肌肽(1mM、3mM、5mM)，并使用LDH检测试剂盒，分析肌肽在衰老星形胶质细胞氧糖剥夺/复灌模型中的保护作用及最佳作用浓度。 8.使用western blot技术，检测正常与衰老星形胶质细胞，在经过急性缺糖缺氧损伤以及氧糖剥夺/复灌处理后，GS含量的变化情况，从而分析正常与衰老星形胶质细胞在脑卒中病理过程中的异同点。 9.使用western blot技术，分析衰老星形胶质细胞OGD8h/recovery24h过程中，肌肽对GS含量的调节作用及作用机制。 结果： 1.星形胶质细胞使用含D-gal(55mM)的细胞培养液处理1周后，β-半乳糖苷酶染色阳性，并且出现星形胶质细胞衰老样特征。 2.与未暴露于D-gal中的正常星形胶质细胞相比，D-gal处理组的衰老星形胶质细胞线粒体活性降低，同时伴随线粒体膜电位的下降。 3.D-gal诱导衰老的星形胶质细胞中，GS表达量降低。另外，脑衰老小鼠模型中，GS表达量同样降低。 4.星形胶质细胞持续72h暴露于10mM谷氨酸中，将出现损伤，并且D-gal诱导衰老组细胞损伤程度最为严重。 5.1H NMR结果显示，D-gal诱导衰老组的小鼠脑内谷氨酸与牛磺酸浓度，显著高于注射生理盐水的对照小鼠;而琥珀酸、谷氨酰胺、丙氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸及胆碱的水平，显著低于注射生理盐水的对照组。另外，两组间N-乙酰天冬氨酸、乳酸、GABA、肌酸、肌醇水平相近。 6.LDH释放实验结果显示，衰老星形胶质细胞经过氧糖剥夺/再灌注处理后，细胞损伤程度较重，而预先加入3mM肌肽对细胞保护作用明显。 7.急性缺糖缺氧时，正常年轻星形胶质细胞与衰老星形胶质细胞GS含量均降低。但在氧糖剥夺/复灌损伤过程中，正常星形胶质细胞GS含量能够自行回调，而D-gal组细胞GS含量却进一步降低。 8.预先加入肌肽，可以上调衰老星形胶质细胞氧糖剥夺/复灌后GS的表达量，而这种上调作用，在加入PKC广谱抑制性药物BISⅡ后消失。 结论： 1.D-gal可以诱导星形胶质细胞出现衰老样特征，因此我们成功建立起一种快速、有效的诱导星形胶质细胞体外衰老方法。 2.D-gal诱导衰老的星形胶质细胞，线粒体活性降低并伴随线粒体膜电位降低。 3.GS是参与星形胶质细胞体内与体外衰老过程的关键酶，同时衰老星形胶质细胞氧糖剥夺/复灌损伤过程也与GS密切相关。 4.衰老星形胶质细胞氧糖剥夺/复灌损伤过程中，肌肽具有保护作用，并能够上调GS表达，而这种上调作用与PKC通路相关。