KDR为靶的siRNA抑制乳腺癌细胞增殖的体内外研究

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背景与目的肿瘤生长、侵袭、转移与肿瘤细胞表面异常表达的生长因子及受体密切相关。血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)在多种肿瘤细胞包括乳腺癌细胞表面异常表达,能特异地促进肿瘤细胞分裂、增殖及迁移,已发现的VEGFR有三种:VEGFR1(FLT-1)、VEGFR2(FLK-1、KDR)和FLT-4,但在肿瘤细胞生长和增殖中起重要作用的主要是FLK-1(KDR)。应用siRNA抑制KDR从而抑制肿瘤细胞增殖可有效应用于肿瘤治疗。本课题采用化学修饰的siRNA在体内外抑制KDR基因表达,探讨化学修饰的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术在乳腺癌基因治疗的可行性和特异性。方法分别选用阳离子脂质体Lipofectamine2000TM和阳离子聚合物纳米粒Invivo jetPEITM为转染试剂,将针对人KDR基因的siRNA转染人类乳腺癌细胞株MCF-7和裸鼠移植瘤,在体内外诱导RNAi。体外采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测siRNA治疗组与对照组KDR基因表达变化。体内裸鼠移植瘤siRNA治疗,观察比较siRNA治疗组和对照组裸鼠生长状态,体重变化及瘤重,RT-PCR及免疫组织化学染色(immunohistochemical staining)检测siRNA治疗组和对照组KDR基因表达的变化。结果体外实验结果显示:靶向KDR基因siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,细胞增长明显减慢,细胞生长抑制率达43.7%;另外,KDR mRNA表达水平也显著降低(p<0.05)。裸鼠体内实验结果显示:siRNA治疗组裸鼠生长状态良好,体重稳定,瘤组织的增长受到明显抑制;RT-PCR、免疫组织化学染色试验均示KDR基因表达水平显著降低。体内外对照组各指标均无显著变化。结论化学修饰的siRNA介导的RNAi在体内外均能成功下调靶基因KDR的表达,抑制MCF-7细胞增殖,是潜在的肿瘤治疗新方法,而KDR亦可作为肿瘤治疗的新靶点。
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