家畜日本血吸虫病诊断试纸条研制及望江县放牧牛蠕虫感染状况调查

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血吸虫病是一种世界性分布的严重危害人畜健康的寄生虫病,迄今为止仍是我国重要的公共卫生问题之一。患病家畜是我国血吸虫病的主要传染源。简便实用的诊断技术在血吸虫病防控、流行病学调查中具有重要作用。蠕虫病是危害放牧牛羊的一大类寄生虫病,摸清其优势虫种以及感染状况,是制定防控对策的关键。虫卵沉淀法是调查吸虫感染最常用的技术,但牛羊等家畜粪便成分复杂,含有较多的纤维素等不易除去的杂质,使得镜检观察较为困难。为此,本论文开展了家畜血吸虫病诊断试纸条研制、望江县放牧牛蠕虫感染状况调查和家畜吸虫粪便虫卵镜检技术的研究,取得了如下成果。一、试纸条抗原的筛选以虫卵可溶性抗原(SEA),成虫可溶性抗原(AWA),全虫抗原,排泄分泌抗原和基因重组抗原rSj06868为候选诊断抗原,通过ELISA分别对黄牛和水牛的血吸虫感染阳性血清进行检测,以P/N值作为筛查标准,筛选适合制备试纸条的抗原。结果SEA对黄牛和水牛的血吸虫感染阳性血清检测的OD值最高,P/N最大,是这5种抗原中最有诊断优势的抗原。研究结果还显示,基因重组抗原rSj06868对黄牛和兔血吸虫感染具有良好诊断价值,但对水牛血吸虫病没有诊断价值,提示今后选择家畜疫病诊断的通用抗原需用不同种类家畜血清进行筛选。二、家畜血吸虫病的试纸条制备及检测效果以胶体金颗粒标记链球菌G蛋白(SPG)为显示剂,以SEA和SPG分别作为试纸条的检测线(T线)和对照线(C线)包被层析膜,制备胶体金免疫层析试纸条。利用该试纸条对实验室前期收集的血吸虫阳性黄牛血清24份、水牛血清24份、羊血清40份,阴性牛血清62份、羊血清5份,前后盘吸虫病牛血清14份,大片吸虫病牛血清6份,以及人工感染血吸虫的小鼠、兔血清进行检测。结果显示该试纸条对水牛、黄牛和绵羊血吸虫病诊断的敏感性为100%,对阴性牛羊诊断的特异性为100%,但不能检出小鼠和兔血吸虫病;对前后盘吸虫病牛血清没有交叉反应,但对大片吸虫病血清交叉反应为50%(3/6)。三、望江县放牧牛蠕虫感染状况调查分别采用饱和盐水漂浮法、虫卵沉淀法、贝尔曼法对安徽省望江县的115头放牧牛的新鲜粪便进行检查,同时对各虫种感染率以及不同品种、性别、年龄牛感染率进行了统计分析。调查结果显示,当地放牧牛感染的蠕虫有夏伯特线虫、捻转血矛线虫、奥斯特线虫、片形吸虫以及肺线虫,总感染率达到90.4%(104/115),其中捻转血矛线虫为感染优势虫种,感染率达70.4%。调查结果对长江流域洲滩放牧牛蠕虫病防治工作以及了解蠕虫与宿主的相互关系具有一定的参考意义,也为本实验室后期进行牛蠕虫病防控研究奠定了基础。四、吸虫虫卵沉淀法诊断技术的改进将常规的清水沉淀改为饱和盐水混悬沉淀,然后在沉淀中加入福尔马林-乙酸乙酯并离心,再用10%KOH消化。对常规方法以及改进方法残留物质质量、人工添加血吸虫虫卵后镜检效果进行了比较。研究结果显示,与常规的清水沉淀相比,改进方法的残留物质减少76.26%,虫卵的检出率从24.0%提高到86.5%。结论:本研究制备的试纸条操作简便,反应灵敏,适合于基层对家畜进行血吸虫病的筛查;改进的吸虫虫卵沉淀法诊断技术提高了检出率;望江县放牧牛蠕虫感染状况调查结果为当地制定相应防控对策提供了基础。
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