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研究背景:腺病毒是导致呼吸系统疾病的重要病原之一,在全世界范围内分布广泛。在导致儿童呼吸道感染的病原中,腺病毒至少占5%-10%。在儿童肺炎中,腺病毒肺炎约占4%-10%,新生儿和幼儿感染腺病毒的肺炎发生率达20%以上。腺病毒引起的肺部及全身炎症反应较其他病毒更重,腺病毒肺炎儿童中,14%-60%的腺病毒肺炎患儿出现肺部相关后遗症。迄今为止,已发现90余种腺病毒血清型。文献表明:不同国家或地区、不同时期流行的腺病毒型别存在差异。目前对腺病毒感染也缺乏精准的检测手段,腺病毒型别与疾病严重程度的相关性也不十分明确。目的:(1)建立人腺病毒荧光定量PCR(qPCR)检测方法;(2)分析深圳地区儿童呼吸道疾病中腺病毒感染的发生情况与亚型分布;(3)分析腺病毒感染患儿的病毒学特征与临床特征以及两者的相关性。研究对象和方法:(1)招募因急性呼吸道感染在深圳市第三人民医院就诊的门诊或住院儿童(≤14岁);(2)建立腺病毒qPCR检测方法,并对患儿样本进行腺病毒检测;(3)对腺病毒阳性的样本,用Hep-2细胞进行病毒分离,对分离的病毒株和未能培养成功的原始样本进行Hexon基因PCR扩增测序,并系统发育树构建;(4)利用方差分析等统计学方法分析HAdV阳性患儿病毒学特征与临床特征的相关性。研究结果:(1)成功建立了腺病毒通用qPCR检测方法,能够覆盖目前已知的所有人腺病毒亚型,其检测灵敏度能达到50个拷贝基因组单量每反应;(2)2018-2019年深圳市儿童急性呼吸道感染腺病毒阳性率为9.98%,其中3-6岁龄组儿童腺病毒阳性率最高(12.5%),6月龄以下儿童腺病毒阳性率最低(1.85%)。144例腺病毒阳性患儿中,男性99例,女性45,男女比例2.2:1;6岁以下儿童腺病毒阳性数占总阳性例数的77.08%。在研究期间,腺病毒月阳性率为3.68%-44.23%不等,其中2018年5月与2018年7月阳性率最低为3.7%,2019年9月和2019年11月阳性率较高,分别为:25%和44.23%。2019年腺病毒阳性率高于2018年(11.93%vs 6.69%);(3)144份阳性样本中,141例成功完成Hexon基因PCR扩增和测序(其中132份来自分离的活病毒,9份来自原始样本)。序列分析结果显示,这些腺病毒包含腺病毒7型(HAdV-B7)58株,腺病毒3型(HAdV-B3)50株,腺病毒4型(HAdV-E4)10株,腺病毒1型(HAdV-C1)6株,腺病毒2型(HAdV-C2)6株,腺病毒6型(HAdV-C6)6株,腺病毒5型(HAdV-C5)2株,腺病毒55型(HAdV-B55)2株,腺病毒B21型(HAdV-B21)1株;(4)HAdV阳性患儿中,发热和咳嗽是最常见的症状表现,39例患儿除了有呼吸道症状还伴有胃肠道症状。危重症患儿出现了ARDS与肺外并发症。在腺病毒感染患儿的诊断中,肺炎占比高达29%。在患儿的实验室检查中,患儿白细胞数增高66例(45.83%),C反应蛋白增高94例(65.28%),血小板(PLT)减少6例。腺病毒B系在导致儿童肺炎发生率上与腺病毒C与E系无显著性差异。HAdV-B7导致的儿童肺炎率与重症肺炎率显著高于HAdV-B3。研究结论:(1)本研究建立了覆盖度广、灵敏度高的HAdV通用检测方法;(2)2018-2019年深圳儿童急性呼吸道感染HAdV阳性率为9.98%。HAdV感染全年均可发生;多感染6岁以下儿童;秋季阳性率最高;有明显性别差异;(3)2018-2019年人腺病毒B、C与E三系在深圳地区流行,以B系为主,其中HAdV-B7最高(41.13%),HAdV-B3次之(35.46%)。首次在深圳检测到HAdV-B55型;(4)HAdV-B7可能与重症感染有较高相关性,在临床上需要重点关注HAdV-B7的患儿。