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淡足侧沟茧蜂Microplitis pallidipes Szepligeti是一种重要的害虫天敌,主要寄生夜蛾科害虫里的中低龄幼虫。本研究针对得到的淡足侧沟茧蜂气味结合蛋白Mp OBP8和Mp OBP10,运用相关生物信息学软件对它们与其他物种的气味结合蛋白进行了序列相似性比对及亲缘关系推断。并成功构建了p ET28a(+)-Mp OBP8、p ET32a(+)-Mp OBP8、p ET28a(+)-Mp OBP10及p ET32a(+)-Mp OBP10原核表达载体,通过对Mp OBP8原核表达条件的优化调整,探索出了它的最优表达条件,获得了含量较高的该气味结合蛋白;对Mp OBP10基因进行了原核表达研究。为后期研究Mp OBP8和Mp OBP10的对化学物质的识别分子机理夯实了基础。主要结果如下:1.淡足侧沟茧蜂Mp OBP8与膜翅目昆虫中红侧沟茧蜂Mm OBP8的亲缘关系最近。Mp OBP10与毁侧沟茧蜂Microplitis demolitor的Md OBP72的进化关系最近,其次是中红侧沟茧蜂的Mm OBP10。Mp OBP8和Mp OBP10与直翅目、鳞翅目、双翅目、鞘翅目昆虫的进化亲缘关系依次变远,两者均与鞘翅目昆虫赤拟谷盗Tribolium castaneum的OBP13亲缘关系最远。2.通过Bam HⅠ和HindⅢ这两种酶进行双酶切的方法构建了p ET28a(+)-Mp OBP8、p ET32a(+)-Mp OBP8、p ET28a(+)-Mp OBP10及p ET32a(+)-Mp OBP10原核表达载体。通过SDS-PAGE检测,p ET28a(+)-Mp OBP8、p ET28a(+)-Mp OBP10均未出现相应大小的目的蛋白条带。而p ET32a(+)-Mp OBP8、p ET32a(+)-Mp OBP10均出现了相应大小的目的蛋白条带。p ET32a(+)-Mp OBP8表达出的目的蛋白条带在上清和沉淀中均存在,且通过原核表达条件的优化,以可溶性形式存在于上清中的目的蛋白含量与存在于沉淀中的目的蛋白含量基本一致。而p ET32a(+)-Mp OBP10原核表达载体表达出的目的蛋白条带,结果显示其以包涵体的形式大量存在于沉淀中。但存在于上清中的可溶性目的蛋白量几乎为零。3.通过不同的诱导温度25℃、28℃、31℃、34℃、37℃,不同的诱导时间1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h、7 h、8 h和9 h,不同IPTG诱导浓度分别是0.1 m M、0.3 m M、0.5 m M、0.7 m M、0.9 m M、1.0 m M,不同诱导时机菌体OD600值分别约为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8,来展开优化表达条件的试验。p ET32a(+)-Mp OBP8原核表达条件的优化显示:最佳诱导温度、诱导时间、诱导时机、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的终浓度分别为25℃、6 h、菌体培养液OD600为0.1~0.3和0.1 mmol/L。4.昆虫气味结合蛋白能辨识、结合不同的挥发性气味分子。不同化学物质与荧光探针氮-苯基-1-萘胺1-NPN可竞争性结合纯化后的重组气味结合蛋白Mp OBP8。重组Mp OBP8与不同浓度的1-NPN的结合,直至两者的结合反应程度达到饱和的状态。运用Graph Pad Prism 5软件计算得出了Mp OBP8与1-NPN的结合常数K1-NPN约为12.68。并绘制出了氮-苯基-1-萘胺1-NPN的浓度与相对荧光值的相关曲线及斯卡査德Scatchard线性化作图。通过重组气味结合蛋白Mp OBP8与37种不同气味分子的结合试验,探索了不同配基气味分子与Mp OBP8的结合效果。通过计算发现β-紫罗兰酮化学配基与淡足侧沟茧蜂Mp OBP8的结合效果较好,解离常数为25.37,IC50值为26μM。其他的挥发性气味物质与Mp OBP8的结合能力较弱,IC50值远大于50μM。以挥发性气味物质的IC50值大于50μM时,不继续计算它们相应的解离常数。综上,淡足侧沟茧蜂的气味结合蛋白Mp OBP8和Mp OBP10均具有昆虫气味结合蛋白的基本特性。分析两者与其他物种的亲缘关系方面,它们具有相似性和不同点。两者在原核表达方面都对p ET32a(+)质粒有偏好性,能表达出靶蛋白。p ET32a(+)-Mp OBP8能表达出可溶性的目的蛋白,且可通过进一步优化表达条件达到获取更多可溶性蛋白的目的。Mp OBP8与研究中所选取的除β-紫罗兰酮之外的挥发性气味物质结合能力均较弱。这可能与挥发物选取的种类有关。也表明了Mp OBP8对气味分子的筛选和识别功能。