【摘 要】
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本课题根据已发表的弓形虫P30和Rop2的基因序列,自行设计合成两对引物,在引物的5'末端适当的位置分别加上合适的限制性内切酶酶切位点,采用分子生物学定向克隆的方法,在保证
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本课题根据已发表的弓形虫P30和Rop2的基因序列,自行设计合成两对引物,在引物的5'末端适当的位置分别加上合适的限制性内切酶酶切位点,采用分子生物学定向克隆的方法,在保证其开放读码框均正确的前提下,使Rop2基因可以定向克隆在P30基因的后面,成功构建了含复合基因的克隆质粒(pUC18-P30-Rop2)及表达质粒(pTriEx-4-P30-ROP2),并在大肠杆菌中成功表达了P30-Rop2复合基因的融合蛋白,表达产物行SDS-PAGE蛋白电泳,初步鉴定其复合表达产物的分子量大小,进一步行Western-Blot检测表达蛋白的免疫活性,为今后从基因水平和蛋白水平进行疫苗研究和诊断试剂开发奠定了基础,为弓形虫疫苗的研制提供了亚单位复合基因的候选成份,应用前景广阔.
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