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第一部分内皮素-1基因Lys198Asn和+138/ex1 ins/del A多态性与江西部分汉族人群早发冠心病的相关性研究研究背景:人类内皮素-1(ET-1)基因多态性与冠心病(CAD)密切相关。本研究旨在探讨江西汉族人群中ET-1基因的两个单核苷酸多态性(SNP)位点(+138 I/D和Lys198Asn)与早发冠心病(EOCAD)的关系,为地区人群CAD的早期诊断和预防提供一些新的思路。方法:通过聚合酶链式反应及基因测序法对88例EOCAD患者(男性≤55岁;女性≤60岁)和52例对照组的两个SNPs位点(+138 I/D和Lys198Asn)进行基因分型。同时行空腹抽血后检测血脂、血糖及肝肾功能,收集受试对象血压、身高、体重、吸烟等资料。用SPSS 17.0软件对数据进行处理,P<0.05有统计学意义。结果:(1)两组患者中,除性别及年龄无差别外,EOCAD组患者的血脂、空腹血糖、血压、体重指数及吸烟人群等均明显高于对照组,两组有统计学差异(P<0.05);(2)ET-1基因+138I/D和Lys198Asn的多态性检测符合Hardy-Weinberg平衡(p>0.05),表明所选取的受试对象来自一个较大的、处于随机分配平衡状态的群体,具有一定代表性;(3)EOCAD患者中,Lys198Asn位点的纯合子G/G、T/T及杂合子G/T的基因型频率分别为76.1%、2.3%及21.6%,T等位基因频率为12.1%,对照组分别为92.3%、0%、7.7%及3.9%;(4)Fisher精确检验表明,ET-1基因Lys198Asn的T等位基因(OR=3.38,P=0.02)和GT/TT基因型(OR=3.76,P=0.02)与EOCAD风险增加有明确的相关性,而+138I/D位点无论在基因型频率还是等位基因频率在两组之间均为无统计学差异;(5)在EOCAD组内,多数CAD的高危因素与ET-1基因+138I/D和Lys198Asn的多态性关系不明显;但吸烟患者中,携带有T等位基因的基因型的比例明显高于携带G/G纯合子,多元logistic回归分析表明,吸烟是与EOCAD相关的唯一独立变量(P<0.05)结论:Lys198Asn位点中Asn等位基因频率与江西汉族人群中EOCAD的发病显著相关;吸烟能显著增加携带Asn等位基因的江西汉族人群发生EOCAD的风险;+138 I/D位点中的不同等位基因频率与江西汉族人群EOCAD的发病无显著相关性。第二部分Lys198Asn位点的Asn等位基因显著增加江西汉族人群早发冠心病发病风险的机制探讨研究背景:Lys198Asn位点中的Asn等位基因频率与江西汉族人群EOCAD发病有关;为探讨其可能机制,我们通过构建体外表达载体分别过表达不同等位基因,明确Lys198Asn多态性对ET-1蛋白表达的影响。方法:根据第一部分实验结果,分别提取含Lys和Asn等位基因的DNA片段,再通过分子克隆技术与含有Flag标签的p GL3.0-Basic质粒载体构建重组质粒;以脂质体法分别转染HEK293T细胞24小时,同时以空载质粒作为对照;加用不同浓度的TNF-α、IL-6和LPS与转染质粒后的HEK293T细胞共同孵育24小时;应用Western blot方法检测细胞中ET-1蛋白含量;用SPSS 17.0软件对数据进行处理,P<0.05有统计学意义。结果:空载质粒转染HEK293T细胞后无外源ET-1蛋白表达,而重组质粒转染后则有较高的外源ET-1蛋白表达;无外源刺激时,Lys198和Asn198质粒转染组中的ET-1蛋白含量无明显差异;在两种浓度(10ng/m L和20ng/m L)的TNF-α或IL-6刺激下,Asn198质粒转染组中的蛋白含量明显高于Lys198质粒转染组,有统计学差异(P<0.05);在两种浓度的LPS刺激下,两组蛋白含量均升高,但两组相比无统计学差异。结论:ET-1基因中的rs5370位点的Asn等位基因较Lys等位基因能显著促进TNF-α和IL-6刺激下的ET-1蛋白表达;ET-1基因中的rs5370位点的多态性不会影响LPS刺激下的ET-1蛋白表达含量;ET-1基因中的rs5370位点不同等位基因可能通过影响特定炎症因子刺激诱导下ET-1蛋白表达量的不同,从而导致江西汉族人群早发CAD的发病风险存在明显差异。