癌症是世界上最致命的疾病之一,胃癌是最常见的消化系统肿瘤,其发病率和死亡率一直居高不下。绝大多数的胃癌患者处于疾病进展期或晚期阶段,失去了根治性手术治疗的机会,且非手术治疗的预后效果亦不佳。细胞凋亡(apoptosis)也叫做程序性细胞死亡(Programmed Cell Death,PCD),是细胞的基本特征之一,真核生物都能够发生细胞的凋亡现象。细胞的凋亡与增殖共同维持着机体正常的生长发育,同时也能维持体内内环境的稳定。如果细胞增殖与凋亡的功能失控,将会导致许多相关疾病的发生。半胱氨酸蛋白酶家族,即Caspase的发现,使人们开始认识到细胞凋亡的核心是由于激活Caspase特殊死亡信号而产生的。通过活化或者抑制Caspase信号系统,可诱导或抑制细胞的凋亡过程,能成为治疗与凋亡相关疾病的新方法。此外,与细胞凋亡相关的Survivin、Blc-2、Bax基因也在此过程中发挥着极为重要的作用。近年来,从天然中草药中寻找抗癌药物的研究一直备受关注。金龙胶囊(Jinlong Capsule，JLC)是经国家正式批准的一种抗癌中成药制剂,由鲜守宫、鲜蕲蛇和鲜金钱白花蛇这三种鲜动物药所组成。全方药性平和、配伍精当,用二蛇之温抑制守宫之寒使其不滞,用守宫之寒抑制二蛇之温使其不燥,可用于多种肿瘤实证的治疗。大量的临床实验和机制研究表明,JLC能抑制多种恶性肿瘤细胞的生长,并且还能诱导其细胞的凋亡,其主要的抗肿瘤作用包括改善免疫系统、联合干预、配合放化疗、提高生活质量等,为广大肿瘤患者带来福音。本论文的主要目的是探讨JLC对人胃癌MGC-803和BGC-823细胞增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步的研究。通过体内外的实验结果发现,与对照组的结果相比,在一定浓度范围内,JLC能够抑制人胃癌细胞的增殖,促进其凋亡。本研究共分为三部分内容。第一部分:探讨金龙胶囊对人胃癌MGC-803和BGC-823细胞株增殖、凋亡的影响目的:研究金龙胶囊(Jinlong Capsule,JLC)对人胃癌MGC-803和BGC-823细胞在增殖和凋亡方面的影响。方法:取对数期人胃癌MGC-803和BGC-823细胞,设JLC浓度组(0.1,0.2,0.4,0.8 mg/ml)、阴性对照组(等量无血清RPMI 1640培养基)以及阳性对照组(5-FU 32 μg/ml)。采用MTT的方法检测各药物浓度组对人胃癌MGC-803和BGC-823细胞增殖抑制的影响;采用电镜观察药物浓度组对人胃癌MGC-803和BGC-823细胞形态结构的变化；运用流式细胞术检测各组药物浓度组对人胃癌MGC-803和BGC-823细胞凋亡的变化;运用细胞周期实验比较不同浓度组的药物作用后胃癌细胞周期的改变。结果:JLC能够促进人胃癌MGC-803和BGC-823细胞的凋亡过程,将细胞的周期阻滞在S和G2/M期,且能抑制细胞增殖,呈浓度依赖性(p<0.05或p<0.01)。结论:JLC可促进人胃癌MGC-803和BGC-823细胞凋亡,影响细胞周期,抑制增殖能力。第二部分:探讨金龙胶囊对人胃癌MGC-803和BGC-823细胞株凋亡的分子机制目的:探讨金龙胶囊(Jinlong Capsule,JLC)对人胃癌MGC-803和BGC-823细胞中Caspase-3、Bax、Bcl-2和Survivin蛋白表达水平的影响,初步研究JLC抑制胃癌发生发展的可能分子机制。方法:在对数期的人胃癌MGC-803和BGC-823细胞中分别加入不同浓度的JLC(0.1，0.2,0.4,0.8mg/ml)、5-FU(32μg/ml)药物,作用 24 后,提取细胞总蛋白,采用 Westem blot方法检测不同蛋白(Caspase-3、Bax、Bcl-2和Survivin)的表达水平。结果:对于人胃癌MGC-803和BGC-823细胞,JLC能降低Bcl-2及Survivin蛋白的表达水平,并呈明显的浓度依赖性,而Bax、Caspase-3的蛋白表达量则随着药物JLC浓度的增加而呈增加的趋势。结论:JLC抑制人胃癌MGC-803和BGC-823细胞的分子机制可能与凋亡相关蛋白、Bcl-2家族有关。第三部分:探讨金龙胶囊对裸鼠胃癌皮下移植瘤生长的影响及相关机制目的:观察金龙胶囊(Jinlong Capsule，JLC)对裸鼠胃癌皮下移植瘤生长的影响,并且探讨部分凋亡相关信号通路是否与JLC抑制裸鼠胃癌皮下移植瘤的作用相关。方法:将胃癌BGC-823红色荧光细胞正常培养后,在裸鼠皮下注射以建立裸鼠的胃癌皮下移植瘤模型。模型建立成功后,将裸鼠随机分为正常组、对照组(生理盐水溶液),JLC低(390mg/kg)、中(780mg/kg)、高(1560mg/kg)剂量组,替吉奥(5-FU,10mg/kg)组,各组裸鼠均以灌胃的方式进行给药。在整个实验期间,每天都要观察裸鼠的一般情况并记录,且每隔2天测算各组裸鼠的皮下生长肿瘤体积并记录,采用动物活体成像技术实时荧光定量以分析肿瘤的大小。在28天的治疗结束后,采用颈椎脱臼法处死各组裸鼠,剥取肿瘤,运用天平以称量瘤重并记录数据。应用免疫组织化学的方法检测各组裸鼠皮下肿瘤组织中凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3和Survivin)的表达水平。结果:成功建立了裸鼠胃癌皮下移植瘤的模型,并使用JLC药物进行处理。该部分的实验结果发现，在治疗过程中各组裸鼠的饮食饮水、行为活动和精神状态并没有明显异常,与对照组相比,JLC药物组能明显抑制移植瘤的体积和瘤重,且呈剂量依赖性(p<0.01)。免疫组化的结果表明:JLC可明显上调移植瘤组织中Bax和Caspase-3的表达,下调Bcl-2和Survivin蛋白的表达,均呈剂量依赖性(p<0.05或p<0.01)。结论:在体内实验中,JLC抑制胃癌裸鼠皮下移植瘤的生长,且差异具有统计学意义,其可能的作用机制是与凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3和Survivin)有关。