目的:基于课题组前期对老年痴呆相关研究结果及文献报道,探讨芍药甘草汤对AD模型大鼠的改善作用,并结合行为学及病理学结果,从炎性反应出发综合分析芍药甘草汤对AD模型大鼠的作用机制。方法:理论探讨:查阅与老年痴呆相关的中英文文献,从传统中医药、现代中医药及国际前沿对AD的发病机制及研究现状进行分析,同时查阅与白芍、甘草及芍药甘草汤相关的药效物质基础和药理作用,为探讨芍药甘草汤对AD模型大鼠的作用及其机制提供理论依据。实验研究:实验选用SPF级SD大鼠45只,采用国际上公认的海马CA1区注射Aβ_1-42复制AD模型,造模成功后连续给药30天,灌胃结束后开始进行水迷宫行为学检测。行为学实验结束后,立即取大鼠全脑及海马,分别用于尼氏染色检测、ELISA检测、RT-PCR检测、免疫组化检测和WB检测。具体检测指标如下:1芍药甘草汤对AD模型大鼠学习记忆能力的影响采用Morris水迷宫实验,观察芍药甘草汤对AD模型大鼠定位航行和空间探索能力的影响。2芍药甘草汤对AD模型大鼠海马病理学的影响采用尼氏染色法观察海马CA1、CA3和DG区神经元形态和数量。3芍药甘草汤对AD模型大鼠Aβ表达的影响采用ELISA法检测海马组织内Aβ_1-40和Aβ_1-42含量表达。4芍药甘草汤对AD模型大鼠炎症反应的影响采用免疫组化法检测海马CA1、CA3、DG和CORT区阳性小胶质细胞形态和数量;采用RT-PCR法检测大鼠海马组织内IL-1β和COX-2表达;采用ELISA法检测大鼠海马组织内IL-6和TNF-α表达。5芍药甘草汤对AD模型大鼠p38MAPK信号通路的影响采用WB法检测AD模型大鼠海马p38、p-p38及p65的表达。结果:1芍药甘草汤对AD模型大鼠学习记忆能力的影响1.1定位航行实验结果与空白对照组比较,假手术组大鼠的上平台时间及游泳总路程无明显变化（P>0.05）,模型组大鼠的上平台时间及游泳总路程增加较多,差异具有极显著性（P<0.01）;与模型组相比,西药组及芍药甘草汤组大鼠的上平台时间及游泳总路程均有不同程度的降低,且差异具有极显著性（P<0.01）;与西药组比较,芍药甘草汤组大鼠的上平台时间无明显变化（P>0.05）,游泳总路程降低,差异具有显著性（P<0.05）。1.2空间探索实验结果与空白组比较,假手术组大鼠穿过原平台的次数无明显变化（P>0.05）,模型组大鼠穿过原平台的次数明显变少,差异具有极显著性（P<0.01）;与模型组相比,西药组及芍药甘草汤组大鼠穿过原平台的次数明显增多,差异具有极显著性（P<0.01）;与西药组相比,芍药甘草汤组大鼠穿过原平台的次数降低,但没有明显差异（P>0.05）。与空白组相比,假手术组大鼠在目标象限的时间略有增加,但两组之间的差异不具有显著性（P>0.05）,而模型组大鼠在第三象限停留的时间降低较大,差异具有极显著性（P<0.01）;与模型组比较,西药组及芍药甘草汤组动物在目标象限停留的时间明显增加,差异具有极显著意义（P<0.01）;与西药组相比,芍药甘草汤组大鼠在目标象限停留的时间略有降低,但差异不具有显著性（P>0.05）。2芍药甘草汤对AD模型大鼠海马病理学的影响尼氏染色结果空白组及假手术组大鼠海马CA1、CA3和DG区神经元细胞的形态正常,排列比较整齐,结构比较完整,细胞核大多为球形或椭圆形,细胞质内有清晰可见的尼氏小体。模型组动物海马CA1、CA3和DG区神经元细胞的形态有较大改变,其表现为神经元细胞多有丢失且排列稀疏,还有的神经元细胞形体出现萎缩变形等,同时细胞质内的尼氏小体减少。给予芍药甘草汤和西药治疗后,其海马不同区域的神经元细胞的形态和数量均得到不同程度的改善。3芍药甘草汤对AD模型大鼠Aβ表达的影响ELISA结果与空白组比较,假手术组大鼠海马组织内Aβ_1-40和Aβ_1-42含量无明显变化（P>0.05）,模型组大鼠海马组织内Aβ_1-40和Aβ_1-42含量明显增加,差异具有极显著性（P<0.01）;与模型组比较,西药组及芍药甘草汤组大鼠海马组织的Aβ_1-40和Aβ_1-42含量明显减少,差异具有极显著性（P<0.01）;与西药组比较,芍药甘草汤组大鼠海马组织的Aβ_1-40含量增加,但差异不具有显著性（P>0.05）,Aβ_1-42含量增加,具有极显著性差异（P<0.01）。4芍药甘草汤对AD模型大鼠炎症反应的影响4.1免疫组化结果与空白组比较,假手术组大鼠海马组织内阳性小胶质细胞的形态和数量无明显变化,模型组大鼠海马组织内阳性小胶质细胞体染色加深,且形态明显增大,数量增多,给药治疗后西药组及中药组动物海马组织内小胶质细胞的损伤均得到不同程度上的改善。4.2 RT-PCR结果与空白组相比,假手术组大鼠海马内的IL-1β和COX-2 mRNA表达无显著变化,模型组大鼠海马组织内的IL-1β和COX-2 mRNA表达上调;与模型组比较,西药组及芍药甘草汤组大鼠海马组织内IL-1β和COX-2 mRNA的表达明显下调;与西药组相比,芍药甘草汤组大鼠海马组织内IL-1β和COX-2 mRNA表达下调。4.3 ELISA结果与空白组比较,假手术组大鼠海马内的IL-6和TNF-α表达无明显变化（P>0.05）,模型组大鼠海马内的IL-6和TNF-α含量增加较多,两组之间比较差异具有极显著意义（P<0.01）;与模型组相比,西药组及芍药甘草汤组大鼠海马内的IL-6和TNF-α含量均有不同程度的减少,差异具有极显著性（P<0.01）;与西药组比较,芍药甘草汤组大鼠海马内的IL-6和TNF-α含量减少,两组之间的差异具有极显著性（P<0.01）。5芍药甘草汤对AD模型大鼠p38MAPK信号通路的影响WB实验结果相对于空白组,假手术组大鼠海马组织内p-p38/p38及p65的表达无明显变化（P>0.05）,模型组大鼠海马内的p-p38/p38及p65的表达明显升高（P<0.01）;与模型组相比,给药后各组动物海马组织内p-p38/p38及p65的表达均有不同程度的降低（P<0.01）;与西药组比较,芍药甘草汤组大鼠海马内p-p38/p38的表达升高,差异具有显著性（P<0.05）,p65的表达无明显变化（P>0.05）。结论:芍药甘草汤对AD模型大鼠具有一定的保护作用;其作用机制可能与其减少神经元损伤、抑制Aβ和炎症因子表达、干预小胶质细胞活化和p38MAPK信号通路表达等有关。