慢性伤口感染和抗生素耐药性的发展是影响全球数百万人的严重临床问题。抗菌肽因其强大的抗菌活性被认为是耐药时代抗生素替代药物。近年来发现,部分抗菌肽还具有促进伤口愈合的功效,这为感染性慢性伤口的治疗提供了更好的药物候选分子。本课题组之前从黑眶蟾蜍中分离出一种多肽cathelicidin-DM,可杀灭多种耐药病原体,同时具有伤口愈合活性。本文就cathelicidin-DM创伤愈合机制展开研究,为药物临床前研究提供基础,制备其水凝胶制剂并尝试初步应用于皮肤组织修复。首先,我们通过固相合成的方法制备了cathelicidin-DM,进行了细胞增殖、细胞迁移、免疫蛋白印迹、酶联免疫吸附、小鼠创伤模型、苏木精-伊红染色、免疫组化等实验。研究结果表明,cathelicidin-DM在细胞水平上可促进Ha Ca T、HFF、HUVEC细胞的增殖且呈浓度依赖以及HFF、HUVEC、RAW.264.7细胞的迁移;通过上调ERK、JNK、P38磷酸化激活MAPK信号通路参与伤口愈合,然而cathelicidin-DM对IL-6、TNF-α的分泌无影响。在动物水平上,cathelicidin-DM可加速小鼠皮肤创伤愈合,提前脱痂;促进小鼠再上皮化和肉芽组织形成、α-SMA的表达及Ⅰ型胶原蛋白的沉积。其次,制备了负载cathelicidin-DM卡波姆水凝胶并使用流变仪和扫描电镜进行表征,评估止血和在局部应用时的组织修复能力。实验表明cathelicidin-DM卡波姆水凝胶具有3D网络结构和良好的流变性能,同时还具有一定的止血能力,促进小鼠全层皮肤非感染和S.aureus感染伤口的愈合。另外,尝试制备了具有温敏效应的壳聚糖水凝胶,作为cathelicidin-DM输送载体。研究发现,负载cathelicidin-DM壳聚糖水凝胶的相变温度为约36℃,在37℃、5 min内凝胶化;温敏壳聚糖水凝胶具有3D网络结构,cathelicidinDM可与壳聚糖分子间作用黏附在水凝胶表面;与负载cathelicidin-DM卡波姆水凝胶一样,具有止血和促进小鼠全层皮肤非感染和S.aureus感染伤口组织修复,其疗效强于单用cathelicidin-DM。综上所述,本课题基于伤口愈合的过程在细胞和动物水平研究发现cathelicidin-DM通过多种途径发挥伤口愈合活性,进一步制备了其水凝胶制剂评价其在小鼠皮肤非感染和S.aureus感染伤口组织的修复能力。研究为cathelicidin-DM创伤愈合机制的理解及其应用提供了有力的证据。