头孢菌素类药物（Cephalosporins）是一族β-内酰胺类广谱抗生素,具有抗菌活性强、疗效高、毒性低等特点。生产这类抗生素的前体头孢菌素C（Cephalosporin C,CPC）由顶头孢霉（Cephalosporium acremonium）发酵生产。用基因工程改造的方法获得高产菌种是进行菌种改良的有效途径。为了方便的进行顶头孢霉菌的基因工程改造,首先必须构建适合在顶头孢霉中进行基因组整合的启动子,以及整合质粒等工具。本文通过PCR的方法,成功克隆了产黄青霉异青霉素N合成酶（IPNS）启动子pcpCp（1.16kb）、顶头孢霉异青霉素N合成酶（IPNS）启动子pcpC（452bp）,经酶切和测序验证,与NCBI上报道的序列一致。这些启动子可以被顶头孢霉的RNA聚合酶识别,用于启动异源基因在顶头孢霉中的表达。为了制备VHb抗体用于免疫印迹检测,需要获得较高纯度的VHb蛋白,构建了pET28a-vgb重组质粒,并发现vgb基因的第二个氨基酸编码是影响VHb蛋白表达的决定因素。当该位点突变成缬氨酸时几乎不表达VHb蛋白。为了实现外源基因的在顶头孢霉中的表达,摸索了顶头孢霉原生质体制备和再生的条件。确定了顶头孢霉传代培养基;用于制备原生质体的培养基为改进型蔗糖液体培养基,培养条件为28℃,150rpm摇瓶培养;采用含0.6mol·L-1的NaCl溶液作为渗稳剂的再生培养基进行再生;采用1000unit·mL-1的Lywellzyme酶进行酶解,0.6mol·L-1的NaCl溶液作为渗透压稳定剂,原生质体数可以达到5.86×106个·ml-1,再生率达41%。为将vgb基因整合至顶头孢霉基因组中,本文构建了顶头孢霉转化载体pDH25-pcpC-vgb。该质粒以潮霉素B抗性（hph）作为筛选标记。顶头孢霉RNA聚合酶能够识别pcpC启动子和PtrpC启动子,分别启动vgb基因和潮霉素B抗性基因的表达,vgb基因和潮霉素B抗性基因共用TtrpC终止序列。为进一步转化顶头孢霉奠定了基础。