目的：　　 1．化疗药物诱导建立多株人肝癌多药耐药模型，鉴定其耐药性，比较亲本株与耐药株生物学特点的差异。　　 2．检测人肝癌细胞亲本株及耐药株中SP细胞比例，探索耐药细胞与SP细胞的联系。　　 3．检测人肝癌多药耐药细胞模型中MAPK表达情况，探索人肝癌细胞株中MAPK信号通路与多药耐药的关系。　　 4．检测人肝癌组织中MAPK与MDR1表达情况，探索人肝癌组织MAPK信号通路与多药耐药的关系，以及MAPK在肝癌组织中的表达情况。　　 方法：　　 1．采用ADM对HepG2、SMMC-7721、BEL-7402等三株人肝癌细胞株进行大剂量冲击和小剂量缓升两种方法诱导。采用生物发光法及MTT法进行药敏实验并计算耐药指数，免疫组化、RT-PCR检测耐药基因及相关蛋白表达。免疫组化法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡，Transwell检测细胞体外侵袭能力，比较耐药株与亲本株的差异。　　 2．荧光显微镜计数淡染细胞，流式细胞仪分析、分选SP细胞，无血清培养观察细胞生长特性，侵袭实验、划痕实验检测SP细胞在侵袭、迁移方面的能力。　　 3.RT-PCR和WesternBlot检测MAPK信号转导系统中ERK1、ERK2、ERK5、JNK1、JNK2、P38α等基因转录及表达。　　 4．制作组织芯片，免疫组化检测MDR1蛋白表达水平，石蜡包埋组织中提取RNA，实时定量PCR检测MAPK细胞信号通路基因表达水平。　　 结果：　　 1．诱导得到六株细胞系。与亲本株相比，耐药株耐药指数均大于5，对多种化疗药耐受性增强，耐药基因、耐药蛋白表达上调2～10倍，并以高浓度冲击法诱导的细胞上调更显著。耐药细胞增殖活性升高20倍以上，细胞周期S期阻滞，体外侵袭能力增强1.3～2.5倍，ADM干预后，凋亡率减少50％以上。　　 2．人肝癌细胞亲本株SP细胞比例最低，低浓度缓升诱导组SP细胞比例最高，高浓度冲击诱导组SP细胞比例居于两者之间。　　 3．人肝癌耐药细胞株MAPK信号转导系统中不同基因和蛋白表达量均有不同比例升高，ERK1、ERK2升高明显。　　 4．肝癌组织MDR1耐药蛋白阳性率达85%以上，但MDR1含量与细胞分化程度无关。肝癌组织MAPK基因和MDR1蛋白表达水平高于癌旁组织。肝癌组织MAPK基因表达水平与MDR1蛋白表达水平相关系数0.35～0.49，MAPK基因之间表达水平相关系数0.17～0.83;MAPK基因表达水平与细胞分化程度不相关。　　 结论：　　 1.ADM能够诱导多株人肝癌细胞产生多药耐药性，导致细胞增殖活性升高、细胞周期改变、抗凋亡能力及侵袭能力增强。　　 2．耐药细胞与SP细胞存在一定联系，耐药诱导可能可以起到富集SP细胞的作用。　　 3．人肝癌多药耐药细胞模型中，MAPK激酶系统表达上调与多药耐药有一定关系。　　 4．人肝癌组织MDR1耐药蛋白表达水平明显高于癌周组织，但MDR1含量与细胞分化程度无关；MAPK基因表达水平与MDR1蛋白表达水平正相关；MAPK基因之间表达水平存在正相关；MAPK基因表达水平与细胞分化程度不相关。