天南星及其易混品鉴别与质量评价研究

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目的:建立红外光谱技术对天南星及其易混品的快速鉴别方法,为天南星的用药安全提供有利保障;通过DNA条形码序列鉴别天南星及其易混品,为天南星的鉴别和遗传多样性研究提供依据;测定天南星水分、浸出物、总黄酮、多糖、鸟苷和腺苷的含量,并通过响应面法优化天南星块茎中多糖、鸟苷和腺苷的提取工艺;采用灰色关联度分析法综合6个指标成分含量评价不同产地天南星的质量,为天南星药材的开发利用、质量标准的提升提供参考数据。
  方法:利用傅里叶红外光谱仪对天南星及其易混品10种30批样品的粉末进行测定,通过比较不同样品的红外光谱峰特征和聚类分析来鉴别天南星;考察了4个DNA条形码(matK、rabL、PsbK-psbI、atpF-atpH)对天南星及其易混品的鉴定能力,通过考察序列的扩增成功率、测序成功率、blast鉴定成功率、种间及种内K2P遗传距离和NJ聚类分析等5个方面的信息对比,确定适合于天南星鉴别的DNA条形码;参照药典的方法测定天南星水分、浸出物、总黄酮含量,采用水浸提法考察提取温度、提取时间、溶剂体积3个因素对天南星块茎多糖提取率的影响,在单因素实验基础上用响应面法优化提取工艺;采用超声法考察溶剂浓度、提取时间、溶剂体积3个因素对天南星块茎鸟苷和腺苷总提取率的影响,在单因素实验基础上用响应面法优化提取工艺;对不同产地的16批天南星的水分、浸出物、总黄酮、总多糖、鸟苷和腺苷的含量数据,采用灰色关联度分析法处理数据,计算不同产地天南星的相对关联度,并进行排序。
  结果:(1)红外光谱特征分析通过样品在波数1323cm-1和1736cm-1的吸收差异,将天南星与除山珠南星之外的易混品区分。红外光谱聚类分析将样品分为3类,1~18为天南星与异叶天南星聚为一类,其他易混品分为两类。(2)在4个条形码序列中,RbcL的鉴定率仅41.67%,matk的鉴定成功率100%,但是扩增成功率仅65.57%,而PsbK-psbI序列atpF-atpH序列的扩增成功率分别为94.91%和93.22%,测序成功率和鉴定成功率均为100%。(3)影响天南星块茎中多糖提取率的主次因素为:提取时间>溶剂体积>提取温度,天南星中多糖的最佳提取工艺条件为:提取温度88℃、提取时间235min、溶剂体积22mL,天南星块茎中多糖的提取率为10.79%。实测天南星中多糖提取率10.74%,验证实测值与预测值相差0.05%;影响天南星块茎中鸟苷和腺苷总提取率的主次因素:溶剂体积>提取时间>溶剂浓度,天南星中鸟苷和腺苷总得率提取的最佳工艺参数为:提取时间40min,溶剂浓度10%,溶剂体积50mL,天南星中鸟苷和腺苷的总提取率为280.64μg/g。实测值为277.65μg/g,实测值与预测值得偏差1.07%。不同产地天南星中,水分最低的是PM为5.47%,浸出物含量最高的是KK为24.45%,总黄酮含量最高的是SN为0.21%,多糖含量最高的是SN为29.58%,鸟苷含量最高的是DD为216μg/g,腺苷含量最高的是DD为408.21μg/g。(4)最优关联度最大的是WC为0.6724,最差关联度最小的是WC为0.4455,相对关联度最大的是WC为0.6015。来自WC的天南星质量最佳,水分5.54%、浸出物含量13.22%,总黄酮含量0.19%,总多糖含量22.98%,鸟苷含量164.85μg/g,腺苷含量327.84μg/g。
  结论:(1)初步建立天南星及其易混品红外光谱技术鉴别法。(2)初步建立天南星及其易混品的DNA条形码鉴别方法。(3)响应面法优化天南星中多糖、鸟苷和腺苷的提取工艺,方法理想,预测性好。单从天南星各指标成分的含量的高低,不能得出天南星质量最佳产地,评价天南星的综合质量,还需进一步分析。(4)灰色关联度分析法结合天南星多指标成分的定量评价方法简单、全面,可用于天南星的质量评价。
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