目的：脊髓损伤严重威胁人类健康，目前尚无有效的治疗手段。脊髓损伤分为原发性和继发性损伤。早期干预继发性损伤，可以改善脊髓组织的生存状况，为功能恢复保存必需的解剖结构，这代表了脊髓损伤治疗的一种潜在方向。炎症反应是继发性损伤的主要成分，在急性脊髓损伤的病理生理学机制中处于中心地位。炎症反应主要受基因表达调控。核因子kappa B（the nuclear factor-kappa B，NF-κB)家族是炎症相关基因表达的关键调节因子，在中枢神经系统损伤中调控多种细胞因子的表达，调节炎症反应。脊髓损伤后，异常激活的NF-κB可以启动神经元的凋亡，抑制NF-κB可以减少炎症相关基因的表达，减轻炎症反应，改善功能恢复。IKKs是激活NF-κB的主要蛋白激酶，在调节NF-κB依赖的基因转录中处于中心地位。IKKβ亚基是IKKs的主要催化亚基，不但能磷酸化I-κB，导致其泛素化及被26S蛋白酶体降解，从而激活NF-κB，而且可直接磷酸化NF-κB亚单位p65的Ser563位点，引起NF-κB激活，因此成为调节NF-κB活性的主要上游靶点。BMS-345541是IKKβ的选择性抑制剂，可在小鼠脑中风模型中，抑制IKKβ活性，减少炎症基因表达和神经元凋亡，但是其在脊髓损伤中的作用尚不明确。本研究拟探讨BMS-345541对脊髓损伤后IKK/NF-κB信号通路的调节作用，了解BMS-345541对脊髓损伤后IKKβ激酶活性、NF-κB的激活、炎症细胞浸润及诱导浸润的粘附分子的表达、脊髓组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达，以及神经运动功能的影响，探讨其神经保护机制。方法：1、健康成年雌性SD大鼠，应用改良Allen法建立大鼠中度脊髓损伤模型，损伤位置在胸12椎体，损伤能量为25g*cm。2、将实验大鼠分成3组，分别为假手术组（仅切除椎板，不损伤脊髓），脊髓损伤组（损伤脊髓，给予1%的DMSO，50μl/公斤体重）和BMS-345541治疗组（损伤脊髓，给予BMS-3455410.5mg/公斤体重）。3、给药方式：在损伤脊髓下方0.5cm处硬膜下穿刺，将药物或溶剂注射进入硬膜下腔脑脊液中。4、观测BMS-345541对IKKβ亚基激酶活性的影响：在脊髓损伤前10分钟硬膜下注入相应药物，在脊髓损伤后0.5hr、4hr、12hr、24hr和72hr处死动物取1cm脊髓组织，应用IKKβ激酶活性光谱法定量检测试剂盒检测激酶活性。在伤后12hr处死动物取1cm脊髓组织标本，免疫印迹分析检测磷酸化I-κBα蛋白表达。5、观测BMS-345541对大鼠急性脊髓损伤后NF-κB激活及运动功能的影响。在脊髓损伤后15分钟硬膜下注入相应药物，在脊髓损伤后24hr处死动物取1cm脊髓组织，应用免疫印迹分析和免疫组织化学检测脊髓损伤后NF-κB p65的表达，应用BBB评分评价脊髓损伤后1－14天后肢运动功能。6、观测BMS-345541对大鼠急性脊髓损伤后细胞凋亡和炎症细胞浸润的影响。在脊髓损伤后15分钟硬膜下注入相应药物，在脊髓损伤后24小时处死动物取1cm长脊髓标本，应用免疫组织化学和免疫印迹分析检测脊髓损伤后组织中Bcl-2、Bax和caspase-3的表达。应用免疫印迹分析脊髓损伤后组织中ICAM-1蛋白表达。应用MPO活性检测试剂盒检测脊髓标本中MPO活性。应用一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测脊髓损伤后组织中细胞凋亡的情况。结果：1、脊髓损伤后IKKβ激酶活性伤后30分钟开始升高，4小时明显升高，为1.05±0.043单位/毫克，12小时达到高峰，为1.47±0.037，24小时下降到0.71±0.027，72小时后恢复到正常水平。BMS－345541干预可以明显抑制IKKβ激酶活性。与脊髓损伤组相比较，在伤后4小时和12小时两个时间点，干预组中IKKβ激酶活性下降近50%，两者有显著性差异（P<0.05）。脊髓损伤后，磷酸化I-κBα蛋白明显增高(P<0.01)；BMS－345541干预可以明显抑制磷酸化I-κBα蛋白表达的增高（P<0.05）。2、在脊髓损伤后24小时，假手术大鼠脊髓组织中几乎没有NF-κB p65阳性细胞，阳性细胞的比例为1.02±0.32%；脊髓损伤组中大鼠的脊髓组织中NF-κB p65阳性细胞数明显增加，阳性细胞的比例达到34.65±1.73%，与假手术组中的大鼠相比较有显著性差异（p<0.05）; BMS-345541治疗可以明显减少脊髓组织中NF-κB p65阳性表达细胞数，阳性细胞比例为10.87±0.56%。蛋白免疫印迹方法结果进一步验证了免疫组织化学检测的结论。运动功能评分显示：在脊髓损伤后第一天，脊髓损伤组中大鼠和BMS-345541治疗组均表现出严重的后肢功能障碍，平均评分分别是1.2±0.25和1.1±0.14，与假手术组中大鼠比较有显著性差异（p<0.01），然而它们两者之间无显著性差异（p＝0.46）。在脊髓损伤后14天，脊髓损伤组中的大鼠后肢仅仅恢复了三关节（髋、膝、踝）的运动，平均分为6.8±0.4；而BMS-345541治疗组中大鼠的后肢能能够足底负重步行，平均得分为10.4±0.5。与脊髓损伤组中的大鼠相比较，BMS-345541治疗组中的大鼠在脊髓损伤后14天的平均得分提高了近50%。3、在脊髓损伤后24小时，损伤组中MPO活性和ICAM-1的表达明显升高，BMS-345541治疗可以明显抑制它们的升高；脊髓损伤后凋亡阳性细胞数明显增加，BMS-345541治疗可以明显减少脊髓组织中细胞的凋亡。免疫组化和Westernblot方法均显示：与假手术组中的大鼠相比较，脊髓损伤后大鼠脊髓中激活型caspase-3表达明显增加， BMS-345541治疗可以明显减少脊髓组织中激活型caspase-3的表达；脊髓损伤后Bax表达明显增加，BMS-345541治疗可以明显减少脊髓组织中Bax的表达；在术后24小时，假手术组中几乎没有Bcl－2表达，脊髓损伤组和BMS-345541治疗组可见脊髓组织中Bcl－2表达明显增加，BMS－345541对Bcl－2的表达无影响。结论：1、脊髓损伤后IKKβ激酶活性明显升高，4小时明显升高，12小时达到高峰，抑制IKKβ激酶活性的药物作用时间窗口应该在伤后4小时内；BMS－345541可抑制脊髓损伤后的IKKβ激酶活性，从而为其在脊髓损伤的治疗提供了理论依据。2、急性脊髓损伤后硬膜下注射BMS－3455414可以有效抑制脊髓损伤导致的NF-κB的激活；BMS－345541可改善急性脊髓损伤后后肢运动功能的恢复，表明其对脊髓损伤具有治疗意义。3、早期硬膜下注射BMS-345541治疗可以减轻急性脊髓损伤后的炎症细胞浸润，减少脊髓组织内的细胞凋亡；BMS-345541通过抑制ICAM-1的表达来干扰中性粒细胞的浸润；BMS-345541可以明显抑制脊髓损伤后caspase-3的激活，保护神经功能；BMS-345541通过减少促凋亡蛋白Bax的表达来抑制凋亡，因而减少细胞的死亡，保护损伤脊髓的神经元。