“疯草”(Locoweed)是棘豆属、黄芪属和苦马豆素属中有毒植物的统称,动物长期误食能引起中毒。现已查明,吲哚里西啶生物碱苦马豆素是其主要致毒物质。另有研究表明苦马豆素具有抗病毒感染、增强免疫、抗肿瘤、抑制肿瘤细胞转移及潜在的抗艾滋病病毒等多种药用活性。针对上述现状,目前研究存在以下几个问题:1.具有良好作用的家畜疯草中毒解毒药物仍处于空白。2.疯草中有效活性成分苦马豆素抗病毒作用机制不明确。本研究从疯草中毒机理出发,通过调节苦马豆素与α-甘露糖苷酶的量化关系,研制出1种疯草中毒治疗药物—速康解毒口服溶液,并对其分别进行了药效和临床治疗试验。为了阐明苦马豆素对牛病毒性腹泻病毒的抗病毒作用机制,及其对免疫细胞因子的调节作用影响,进行了以下实验研究,并得出一定的结论。(1)通过建立茎直黄芪饲喂试验家兔中毒模型,利用临床观察、体重称量、α-甘露糖苷酶活性测定和组织病理学观察等方法研究了速康解毒口服溶液对茎直黄芪中毒的药效作用,得出以下结论:攻毒组、攻毒解毒治疗组实验家兔均在18天左右出现中毒症状,表明人工中毒实验家兔模型建立成功。试验中速康解毒口服溶液能显著性升高因中毒造成的体重下降和α-甘露糖苷酶活性降低(P<0.05),解毒治疗组较攻毒组的病理学变化轻微,且在试验期内未出现家兔死亡,表明速康解毒口服溶液具有较好的解毒作用。(2)对一起突发疑似疯草中毒的小尾寒羊共计131只,通过临床给予速康解毒口服溶液进行解毒治疗得出以下结论:经过诊断、询问,确定此次突发疑似疯草中毒为黄花棘豆中毒,速康解毒口服溶液有效率达到77.86%,表明速康解毒口服溶液具有良好的解毒效果,可以应用于疯草中毒的临床治疗。(3)利用细胞培养技术,采用CPE观察法和MTT比色法相结合的方法,检测不同作用方式下,不同浓度苦马豆素对BVDV增殖的抑制作用和综合杀灭作用,得出以下结论:在体外随苦马豆素质量浓度的增加,其对BVDV的增殖抑制和综合杀灭作用都具有很好的量效关系,比较两种作用方式下的治疗指数2.5和3.2,说明苦马豆素对BVDV具有良好的综合杀灭作用,且对抑制BVDV病毒增殖具有一定的作用,表明苦马豆素可能对侵入细胞的BVDV的复制增殖产生抑制以及直接杀灭游离BVDV粒子而发挥作用。(4)通过建立BVDV感染BALB/c小鼠模型,利用不同剂量苦马豆素对其进行抗病毒治疗,得出以下结论:高、低剂量苦马豆素药物组(1/5LD50)给药24~48h后对小鼠腹泻症状较病毒组有显著减轻或减慢作用,对各实验组BALB/c小鼠的肝、肾、心、肺、脾组织的病理切片观察结果综合比较发现,各实验组受病毒感染侵害严重程度依次分别为:病毒感染组(B2)>苦马豆素低剂量药物组(1/5LD50)(B4)>苦马豆素高剂量组(1/5LD50)(B3)≥病毒唑药物组(B5),说明苦马豆素在体内也具有一定的抗病毒作用。(5)采用双抗夹心ELISA法检测苦马豆素对BVDV感染BALB/c小鼠中IFN-α、IFN-β表达水平的影响,得出以下结论:苦马豆素对病毒感染引起的小鼠IFN-α、IFN-β表达量下降具有显著的上调作用,表明苦马豆素可能通过促进IFN-α、IFN-β表达水平诱导细胞合成抗病毒蛋白,发挥间接抗病毒的作用,也可能通过调控活化BVDV易感细胞,如T细胞、B细胞等,提高MHC分子的表达,促使CD8+T细胞反应形成,进而杀伤感染病毒的靶细胞来影响机体的抗病毒免疫应答反应。(6)采用双抗夹心ELISA法检测BVDV感染BALB/c小鼠中共刺激分子CD80和CD86表达水平的影响,得出以下结论:苦马豆素对病毒感染引起的小鼠共刺激分子CD80和CD86表达量下降均具有显著的上调作用,表明苦马豆素可能通过上调共刺激分子CD80和CD86表达水平,刺激T细胞的活化,产生淋巴因子,导致靶细胞发生溶解、破坏,增强机体的抗病毒免疫应答。(7)采用双抗夹心ELISA法检测BVDV感染BALB/c小鼠中IL-1、IL-4、IL-15、IL-12、IL-6和IL-10表达水平的影响,得出以下结论:苦马豆素对病毒感染引起的小鼠IL-1、IL-4、IL-15、IL-12、IL-6表达量下降均具有显著的上调作用,表明苦马豆素能够通过上调小鼠IL-1、IL-4、IL-15、IL-12、IL-6的表达水平,刺激、促进B细胞和T细胞活化增殖,增强机体细胞免疫应答,并通过对感染靶细胞杀伤功能来影响机体的抗病毒免疫调节作用。另苦马豆素对病毒感染引起的小鼠IL-10表达量上升具有显著的下调作用,表明苦马豆素可能通过降低IL-10的表达水平,产生对Th2体液免疫应答的抑制调节,影响机体的抗病毒免疫作用。并推测苦马豆素诱导的机体抗病毒免疫应答以细胞免疫应答的方式为主。综上所述,针对疯草中毒引起的家畜中毒研制的治疗药物速康解毒口服溶液具有良好的解毒效果;从疯草中提取分离获得的生物活性成分苦马豆素在体内、体外均对BVDV具有良好的抗病毒作用,其抗病毒作用机制可能是苦马豆素能进入动物机体细胞内抑制BVDV的复制增殖或直接灭活游离BVDV粒子,并能通过促进、刺激相关细胞因子表达量的上调或下调,诱导机体自身免疫应答,协同发挥抗病毒作用。