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目的筛选经17-AAG-M预处理的人非小细胞肺癌A549细胞在X-ray作用下差异表达的miRNA;分析出适用于联合17-AAG-M、X-ray以治疗NSCLC的miRNA;研究其在A549细胞中的作用和对放射反应能力的影响,评估其与17-AAG-M和X-ray联合治疗NSCLC的潜在适用性;并分析其对A549细胞电离辐射后DNA损伤反应(DDR)的影响。方法溶剂透析法制备17-AAG单包胶束(17-AAG-M)。高分辨透射电子显微镜观察胶束的形态特征及分布,纳米粒度及zeta电位分析仪测定胶束的粒径大小和分散度,紫外分光光度法测定浓度。芯片实验筛选经17-AAG-M预处理的A549细胞在4Gy照射后24h差异表达的miRNA。通过TCGA数据库分析可能涉及放射反应的兴趣miRNA在肿瘤中的表达情况及与LUAD临床参数的关系,预测出适用于联合17-AAG-M和X-ray以共同治疗肺癌的miRNA(目标miRNA)。利用miRbase数据库预测目标miRNA:hsa-miR-30a-3p的靶基因以进行GO及KEGG分析,通过qPCR检测A549细胞中hsa-miR-30a-3p在17-AAG-M与X-ray作用下的表达情况。MTT实验和克隆形成实验检测过表达hsa-miR-30a-3p对A549细胞活力、增殖的影响,及联合X-ray、17-AAG-M后的变化;利用单击多靶模型SF=1-(1-e D/D0)拟合细胞存活曲线分析过表达hsa-miR-30a-3p对A549细胞放射敏感性的影响,及与17-AAG-M联合后放射反应能力的改变。确认hsa-miR-30a-3p在A549细胞放射反应中的作用后,通过γ-H2AX免疫荧光染色实验和细胞周期实验分析过表达hsa-miR-30a-3p对A549细胞电离辐射后DNA损伤反应(DDR)的影响。结果(1)使用溶剂透析法成功制备出粒径小、分散性好且稳定的17-AAG单包胶束(17-AAG-M):平均粒径为(66.96±0.61)nM,多分散系数(PDI)为0.149,高分辨透射电子显微镜结果证实17-AAG-M周边圆整,近似球形且分布均匀。(2)芯片实验证实了电离辐射影响miRNA的表达,改变了 miRNA的表达谱。17-AAG-M预处理24小时的A549细胞中筛选出20个在4Gy照射后24小时差异表达的 miRNA(FC(abs)≥2.0 且 p值≤0.05)。(3)利用TCGA明确了可能涉及放射反应的miRNA在肿瘤中(特别是肺腺癌)的表达情况,及与LUAD临床参数的关系。确认了目标miRNA:hsa-miR-30a-3p在大多数人类肿瘤特别是肺癌中出现明显低表达的情况,并与LUAD患者的病理性T期、性别相关。(4)GO和KEGG分析示hsa-miR-30a-3p涉及含细胞增殖在内的50个生物学过程,影响肿瘤信号通路、MAPK信号通路及细胞周期等。(5)qPCR结果证实了无论A549细胞有无经过17-AAG-M预处理,hsa-miR-30a-3p的相对表达量在4Gy照射后24h均发生了下降(Control组:1.00;X-ray 组:0.72;17-AAG-M组:2.42;17-AAG-M+X-ray组:0.16)。(6)MTT结果显示A549细胞转染hsa-miR-30a-3p mimics 24h后抑制了肿瘤细胞的活力(存活率:78.52%),并在X线和17-AAG-M作用下对A549细胞的毒性作用更强。(7)克隆形成实验证实过表达hsa-miR-30a-3p能够抑制肿瘤细胞的增殖能力(p<0.05),并可以提高人非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性,联合17-AAG-M具有更加明显的肿瘤抑制效果和辐射增敏作用,放射增敏比为1.48。(8)过表达hsa-miR-30a-3p或使用17-AAG-M均能使电离辐射诱导的A549细胞中DNA双链断裂点数目明显增多,造成DNA损伤修复延迟,联合组的效果更显著。(9)17-AAG-M联合X-ray能够引起明显的G2/M期阻滞现象,而过表达hsa-miR-30a-3p亦会干扰细胞周期进程。结论hsa-miR-30a-3p在非小细胞肺癌中低表达,且在X-ray和/或17-AAG-M作用下发生差异表达。过表达hsa-miR-30a-3p可以抑制人非小细胞肺癌A549细胞的活力和增殖能力,并增强A549细胞的放射反应能力,具有辐射增敏效果;联合17-AAG-M后效果更显著。这可部分归因于hsa-miR-30a-3p和/或17-AAG-M联合X-ray引起了更明显的DNA损伤修复延迟现象,并干扰了细胞周期进程。