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由日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的日本乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）是具有严重危害的人畜共患病,在缺少治疗乙型脑炎特效药物的情况下,免疫接种是防控该病最有效的方法。为探讨乙型脑炎DNA基因疫苗免疫犬后的免疫效果及安全性,本研究使用乙型脑炎病毒（JEV）强毒株GZ株重组真核质粒pcDNA3.1-pr M/E-q联合pcDNA3.1-NS1-NS2A-q和乙型脑炎（JE）弱毒疫苗（SA14-14-2株）分别在0 d、14 d、28 d接种3月龄犬,对免疫后的犬只进行免疫应答检测及病毒残留检测,以期为乙型脑炎的防控做出贡献。1.乙型脑炎DNA基因疫苗的免疫效果评价免疫前（0 d）及免疫后242 d（8个月）内使用Elisa检测法检测免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）水平。免疫前（0 d）及免疫后42 d内,对JEV强毒株重组质粒组、JEV弱毒疫苗组和对照组所有实验犬进行前肢静脉采血,将血液进行流式细胞分析,检测T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+T淋巴细胞水平;免疫前（0 d）及免疫后72d内使用Elisa检测法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）水平。实验结果显示:（1）接种0.2 m L剂量时,免疫后3 d至242 d间JEV强毒株重组质粒组和JEV弱毒疫苗组实验犬IgM、IgG水平升高,并极显著（P＜0.01）高于照组,对照组IgM和IgG水平无明显变化;JEV强毒株重组质粒组IgM水平略低于JEV弱毒疫苗组,差异不显著（P＞0.05）;免疫后7 d,JEV强毒株重组质粒组实验犬IgG水平显著（P＜0.05）低于JEV弱毒疫苗组,其余时间JEV强毒株重组质粒组实验犬IgG水平也略低于JEV弱毒疫苗组,但差异不显著（P＞0.05）;免疫前（0 d）至免疫后42 d间,JEV强毒株重组质粒组和JEV弱毒疫苗组CD4+/CD8+比值均升高,对照组无明显变化趋势,两实验组和对照组实验犬CD4+/CD8+比值比较差异不显著（P＞0.05）,JEV强毒株重组质粒组实验犬CD4+/CD8+比值略低于JEV弱毒疫苗组,但差异不显著（P＞0.05）;JEV强毒株重组质粒组和JEV弱毒疫苗组实验犬TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8等细胞因子水平升高,对照组无明显变化,JEV强毒株重组质粒组细胞因子水平略低于JEV弱毒疫苗组,两实验组细胞因子水平极显著（P＜0.01）高于照组。（2）接种0.3 m L剂量时,免疫后3 d至242 d间JEV强毒株重组质粒组和JEV弱毒疫苗组实验犬IgM、IgG水平升高,对照组IgM、IgG水平无明显变化,且两实验组IgM和IgG水平极显著（P＜0.01）高于照组;免疫后3 d至182 d时,JEV强毒株重组质粒组IgM水平略高于JEV弱毒疫苗组,差异不显著（P＞0.05）,免疫后212 d和242 d JEV强毒株重组质粒组IgM水平下降至低于JEV弱毒疫苗组,差异不显著（P＞0.05）;JEV强毒株重组质粒组IgG水平略高于JEV弱毒疫苗组,但差异不显著（P＞0.05）;免疫后JEV强毒株重组质粒组、JEV弱毒疫苗组实验犬CD4+/CD8+比值均升高,但JEV强毒株重组质粒组略高于JEV弱毒疫苗组,差异不显著（P＞0.05）,对照组无明显变化;JEV强毒株重组质粒组和JEV弱毒疫苗组TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8等细胞因子水平升高,对照组未见明显改变,JEV强毒株重组质粒组细胞因子水平略高于JEV弱毒疫苗组。（3）接种0.5 m L剂量时,免疫后3 d至242 d间JEV强毒株重组质粒组和JEV弱毒疫苗组实验犬IgM、IgG水平升高,对照组IgM、IgG水平无明显变化,且两实验组IgM和IgG水平极显著（P＜0.01）高于照组;免疫后3 d和7 d时,JEV强毒株重组质粒组IgM水平显著（P＜0.05）高于JEV弱毒疫苗组;免疫后14 d至35 d,JEV强毒株重组质粒组IgM水平极显著（P＜0.01）高于JEV弱毒疫苗组;免疫后42 d至152 d时,JEV强毒株重组质粒组IgM水平略高于JEV弱毒疫苗组,差异不显著（P＞0.05）;免疫后182 d至242 d,JEV强毒株重组质粒免疫组IgM水平下降至极显著（P＜0.01）低于JEV弱毒疫苗免疫组;JEV强毒株重组质粒免疫组实验犬IgG水平略高于JEV弱毒疫苗免疫组,差异不显著（P＞0.05）;免疫后JEV强毒株重组质粒组、JEV弱毒疫苗组实验犬CD4+/CD8+比值均升高,对照组无明显变化趋势,JEV强毒株重组质粒组CD4+/CD8+比值略高于JEV弱毒疫苗组,但差异不显著（P＞0.05）;JEV强毒株重组质粒组和JEV弱毒疫苗组TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8等细胞因子水平升高,对照组未见明显改变,JEV强毒株重组质粒组细胞因子水平略高于JEV弱毒疫苗组。实验结果说明,JEV强毒株重组质粒pcDNA3.1-pr M/E-q、pcDNA3.1-NS1-NS2A-q与JEV弱毒疫苗（SA14-14-2株）均能够诱发犬机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答,体内的IgG抗体在免疫后72 d可达到峰值,存在期可达8个月;不同剂量免疫效果比较:JEV强毒株重组质粒组在接种0.2 m L剂量时免疫效果略低于JEV弱毒疫苗组;在接种0.3 m L、0.5 m L剂量时,JEV强毒株重组质粒组免疫效果略优于JEV弱毒疫苗组;两实验组犬血清中IgM、IgG、TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8水平及CD4+/CD8+比值随免疫剂量的增加而升高。2.乙型脑炎DNA基因疫苗的安全性评价免疫前后对所有实验犬进行健康情况监测;免疫后242 d,每实验组随机抽取一只犬,对照组随机抽取一只犬,经外科手术穿刺取出无菌新鲜脑脊液,进行透射电镜观察;取无菌新鲜大脑、小脑、心、肝、脾、肺、肾等组织进行HE染色病理组织切片制作和RT-PCR检测。结果显示:所有实验犬均未出现全身反应、局部反应、体温升高、呕吐、腹泻、减食、意识障碍等症状;JEV强毒株重组质粒组、JEV弱毒疫苗组和对照组脑脊液透射电镜检测均未观察到乙型脑炎病毒颗粒;HE染色病理组织切片观察也未发现明显病理变化;RT-PCR检测未发现组织中病毒存在。实验结果表明JEV强毒株重组质粒pcDNA3.1-pr M/E-q、pcDNA3.1-NS1-NS2A-q与JEV弱毒疫苗（SA14-14-2株）接种犬后具有良好安全性。