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目的：1.观察原代星形胶质细胞中缝隙连接(GJ)在缺氧/复氧损伤和缺氧后处理之间的差异。2.运用GJ工具药，改变GJ功能后，观察缺氧后处理对细胞保护作用的变化。3.初步探讨缺氧后处理保护作用的可能作用机制。方法：采用细胞培养技术，取24h新生SD大鼠大脑皮层，培养星形胶质细胞，在细胞纯化后，通过胶质纤维酸性蛋白特异性免疫荧光鉴定星形胶质细胞纯度。建立星形胶质细胞缺氧/复氧模型和缺氧后处理模型。采用细胞接种荧光示踪法(Parachute Assay)检测星形胶质细胞间的荧光传递功能。MMT法检测缺氧后处理对星形胶质细胞存活率的影响，采用Annexin V/PI双染法和Hochest33258荧光染色法观察HPO对H/R损伤导致的细胞凋亡的影响。采用Western blot检测缺氧后处理及调控GJ功能后，HPO对细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3表达的影响以及对细胞Cx43蛋白和Src激酶蛋白表达的影响。通过免疫荧光法(Immunofluorescence Assay)检测HPO及调控GJ功能对星形胶质细胞膜表面Cx43蛋白表达的影响。最后通过siRNA特异性干扰Cx43蛋白，观察其对H/R损伤和HPO的影响。结果：对星形胶质细胞进行纯度鉴定后发现，荧光显微镜下占光镜下星形胶质细胞比例为95%以上，说明得到了高纯度星形胶质细胞。荧光示踪实验结果发现，与正常对照组相比，H/R组荧光传递受体细胞数增加；较H/R组，HPO组荧光传递受体细胞数降低；较HPO组，用10μM GJ增强剂RA预处理24h后的HPO组荧光传递受体细胞数增加，用25μM GJ抑制剂oleamide预处理1h后的HPO组荧光传递受体细胞数减少(p<0.01)。结果表明，在星形胶质细胞中，HPO可显著降低H/R所致的GJ功能增强。通过MTT实验结果发现，较正常对照组，H/R组细胞存活率降低0.370±0.027(p<0.01)；较H/R组， HPO组细胞存活率增加0.180±0.096(p<0.05)；而较HPO组，使用RA预处理的HPO组的细胞存活率降低0.188±0.049(p<0.05)，使用oleamide预处理的HPO组的细胞存活率增加0.186±0.089(p<0.05）。MTT结果说明HPO可以减少由H/R所导致的细胞存活率降低，而通过调控GJ功能，可以影响HPO的这种作用。Annexin V/PI双染实验结果显示，各组细胞早期凋亡率为0.082±0.009，0.357±0.027，0.217±0.008，0.278±0.021和0.150±0.019。较正常对照组，H/R组的凋亡率明显增加，而HPO可明显抑制由H/R所引起的细胞凋亡(p<0.01)。在使用了GJ增强剂RA和GJ抑制剂oleamide预处理后，细胞凋亡率较HPO组分别增加和降低(p<0.01)。Hochest33258荧光染色实验结果显示，与正常对照组相比，H/R组细胞凋亡率增加；进行HPO后，细胞凋亡率较H/R组降低；而较HPO组，使用RA预处理的HPO组的细胞凋亡率增加，使用oleamide预处理的HPO组的细胞凋亡率降低。通过western blotting实验发现，与空白对照组相比， H/R组Bax/Bcl-2的比例增加(p<0.01)；在进行后处理后，较H/R组，Bax/Bcl-2的比例降低(p<0.01)；与HPO组相比，用RA预处理的HPO组Bax/Bcl-2的比例增加(p<0.05)，用Olea预处理的HPO组Bax/Bcl-2的比例降低(p<0.05)。另外，对caspase-3蛋白表达进行统计分析后，与空白对照组相比，H/R组caspase-3剪切条带表达增加(p<0.01)；与H/R组相比，HPO组caspase-3剪切条带表达减少(p<0.01)；与HPO组相比，用RA预处理的HPO组caspase-3剪切条带表达增加(p<0.01)，用Olea预处理的HPO组caspase-3剪切条带表达减少(p<0.05)。与正常对照组相比，H/R组Src激酶表达增加(p<0.01)，而经过后处理后，Src激酶表达降低(p<0.01)。较HPO组，使用RA预处理的HPO组Src激酶表达增加(p<0.05)，使用oleamide预处理的HPO组的Src激酶表达减少(p<0.05)。通过免疫荧光检测星形胶质细胞膜表面Cx43蛋白表达可发现， H/R组，细胞膜Cx43表达较正常对照组异常增强，而HPO可显著减少Cx43的表达。在用10μM GJ增强剂RA预处理24h后，HPO组的Cx43表达增加，而在用25μM GJ抑制剂oleamide预处理1h后，HPO组Cx43表达减少。通过western blotting检测并对条带灰度值扫描并进行统计学分析后，较空白对照组，H/R组Cx43蛋白表达增加。较H/R组，HPO组降低(p<0.01)。而与HPO组相比，RA预处理组蛋白表达增加(p<0.05)，Olea预处理组蛋白表达降低(p<0.05)。这说明GJ功能的改变有可能与Cx43蛋白表达的变化有关。采用siRNA干扰Cx43蛋白表达可以发现，阴性对照组对细胞GJ功能、细胞存活率和凋亡率无显著影响(p>0.05)，但与阴性对照组相比，Cx43-siRNA转染组可显著降低由H/R导致的GJ功能增加(p<0.01)。与阴性对照组相比，Cx43-siRNA转染组也显著抑制了由H/R导致的细胞存活率降低(p<0.01)，。Cx43-siRNA转染组较阴性对照组，可显著降低H/R导致的细胞早期凋亡率增加(p<0.01)。 Cx43-siRNA转染组显著降低H/R导致的细胞晚期凋亡率增加(p<0.01)。以上结果说明干扰Cx43蛋白，抑制GJ功能，可以抑制由H/R所致的细胞凋亡率增加。结论：1.缺氧后处理可以降低由缺氧/复氧损伤导致的星形胶质细胞间GJ功能增强。2.缺氧后处理对缺氧/复氧损伤的保护作用可能与降低GJ功能有关。3.改变GJ功能会影响缺氧后处理的保护作用。4.降低GJ功能导致的缺氧后处理保护作用可能与Bax/Bcl-2、caspase3相关凋亡蛋白有关。