游离小孢子培养技术在作物遗传育种上具有重要的应用价值,通过该技术一方面可以快速获得纯合体,缩短育种年限,提高育种效率。另一方面,由小孢子培养获得的胚状体和再生植株还可以广泛的应用于构建遗传图谱、基因定位、转基因育种以及染色体工程等等。试验以甘蓝的11种基因型为材料,进行游离小孢子培养。研究甘蓝基因型及其影响因素对小孢子诱导培养的影响,以秦甘80、8398等为材料,研究花蕾长度、培养基蔗糖浓度、低温预处理、高温前处理、激素以及秋水仙碱等对甘蓝小孢子诱导培养的影响。主要结果如下:1.不同基因型材料适宜取样花蕾的大小有一定的差异。多数品种适宜取蕾长度为4.5~5.49mm;选择略圆形三裂状小孢子占绝大多数的花蕾进行游离小孢子培养较适合。2.基因型是影响甘蓝小孢子诱导培养成功的关键因素。不同甘蓝基因型小孢子培养的诱导率差异显著。11个供试材料中有5个基因型能诱导胚状体,其中秦甘80、8398 2个材料胚状体诱导频率较高;WG03、绿球66、秦甘60、0268、FW25、FW02等6份材料无法获得胚状体。3.培养基最适的蔗糖浓度为13%,但17%的蔗糖浓度更有助于维持细胞存活率。4.低温预处理和适当的高温处理是小孢子培养中提高胚状体诱导频率的重要因素。低温预处理对小孢子胚产量有显著影响,不同基因型所需预处理时间不同。供试材料经低温预处理,小孢子胚产量均有明显提高。在小孢子培养前对花蕾进行0～4℃24h的低温预处理,并且培养初期给予小孢子33℃24h的高温暗培养,可以获得较好的诱导效果。5.激素在小孢子诱导培养中具有重要的影响作用,但不同基因型对激素的反映不同。通过对供试材料在NLN-13液体培养基中添加激素6-BA与NAA 5种浓度比例,进行甘蓝小孢子诱导胚状体培养。8398在不加激素时出胚率较高为4.85胚/蕾,秦甘80加入0.05mg/l 6-BA其效果最好为6.20胚/蕾。6.秋水仙碱直接处理结球甘蓝游离小孢子,以不加秋水仙碱的处理最好。