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卵巢肿瘤是常见的妇科肿瘤,可发生于任何年龄。其中上皮性卵巢癌是最常见的卵巢恶性肿瘤组织学类型,约占卵巢肿瘤的50%～70%,主要包括浆液性癌、粘液性癌、子宫内膜样癌和透明细胞癌。上皮性卵巢癌其发病率位于妇科恶性肿瘤第三位,死亡率却位于妇科恶性肿瘤之首位。其预后较差的主要原因是是缺乏早期的检测方法、晚期患者缺乏有效治疗方法和出现的高耐药率。由于发病早期无明显的临床症状,70%以上的卵巢癌患者因腹痛腹胀就诊时已为晚期,其特征是盆腹腔内出现广泛转移伴腹水的聚积,使病情进展迅速。侵袭和转移是卵巢癌患者死亡的主要原因,是对治疗构成主要障碍的重要步骤。因此,探讨卵巢癌的侵袭和转移分子机制,寻求有效的靶向治疗是上皮性卵巢癌的研究重点之一。迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MⅡP)基因又称侵袭抑制蛋白45(Ⅱp45)基因,它是位于染色体1p36.22上的一种抑癌基因,可编码由388个氨基酸组成的一种高亲水性蛋白质,并且预测分子量为45kDa。最近的研究证实,MⅡP可通过PI3K/AKT、NF-kB、Rac-1等多种信号通路参与介导肿瘤细胞的增殖与转移。已有相关报道,MⅡP在子宫内膜癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌、胶质瘤等多种恶性肿瘤中低表达,上调MⅡP表达后可明显抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移。NF-kB(nuclear factor-kB)是由两种主要亚基p65和p50所构成的一种诱导相关基因转录的转录因子。NF-kB信号通路激活后可调控多种基因的表达,如:细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等,这些细胞因子已被报道在多个水平上对恶性肿瘤的发生有显著的作用,包括促进生长、增殖、侵袭、转移和血管生成。目的检测MⅡP在不同卵巢组织的表达水平,探讨MⅡP对卵巢癌SKOV3细胞株增殖和侵袭能力的影响,并研究MⅡP是否通过NF-kB信号通路发挥作用。方法1.分别采用免疫组化SP法和qRT-PCR法检测45例上皮性卵巢癌组织和25例正常卵巢组织中MⅡP蛋白阳性表达率及MⅡPmRNA相对表达量,并分析MⅡP与上皮性卵巢癌临床病理特征间的相关性。2.培养卵巢癌SKOV3细胞株,用过表达质粒pcDNA3-MⅡP转染的SKOV3细胞作为实验组、空载体质粒pcDNA3转染的SKOV3细胞作为阴性对照组,未转染质粒的SKOV3细胞作为空白对照组。采用qRT-PCR法和Western blot法检测三组细胞中MⅡPmRNA相对表达量和MⅡP蛋白表达水平,验证过表达载体质粒的转染效果。3.采用CCK-8法和Transwell法检测MⅡP对卵巢癌SKOV3细胞株增殖和侵袭能力的影响。4.采用Western blot法检测三组细胞中p65、p-p65和ICAM-1蛋白表达水平。结果1.上皮性卵巢癌组织中NⅡP蛋白阳性表达率为31.1%,明显低于正常卵巢组织76.0%,两者之间差异具有统计学意义(P<0.001)。2.在上皮性卵巢癌组织中FIGO Ⅰ+Ⅱ期MⅡP蛋白阳性表达率明显高于Ⅲ+Ⅳ期,其蛋白阳性表达率分别为44.0%和15.0%;在淋巴结清扫中,有淋巴结转移组明显低于无淋巴结转移组,其蛋白阳性表达率分别为23.8%和64.3%。上皮性卵巢癌组织中MⅡP蛋白阳性表达率与FIGO分期和有无淋巴结转移有关,差异具有统计学意义(P<0.05)。而与年龄、组织学分级、病理类型无关(P>0.05)。3.上皮性卵巢癌组织和正常卵巢组织中MⅡPmRNA相对表达量分别为0.969±0.380、2.439±0.991。上皮性卵巢癌组织MⅡPmRNA相对表达量低于正常卵巢组织,差异具体统计学意义(P<0.01)。4.细胞实验中,实验组、阴性对照组和空白对照组细胞中MⅡPmRNA相对表达量分别为5.856±0.646、1.236±0.116、1.077±0.150;MⅡP蛋白相对表达量分别为 78.336±5.059、40.338±6.656 和 38.050±1.098。实验组细胞中 MⅡPmRNA 相对表达量和MⅡP蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.001)。说明过表达质粒pcDNA3-MⅡP有效上调了卵巢癌SKOV3细胞中MⅡP的表达,可用于后续实验。5.相对于阴性对照组细胞和空白对照组细胞而言,实验组细胞增殖能力明显受到抑制,且随时间的延长增殖能力降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。6.实验组、阴性对照组及空白对照组细胞24小时穿膜细胞数分别为:94.200±15.834、149.800±7.949 和 163.600±4.037。实验组细胞穿膜细胞数明显少于阴性对照组和空白对照组细胞,差异具有统计学意义(P<0.001)。7.实验组、阴性对照组和空白对照组细胞中p-65蛋白相对表达量分别为:76.027±3.256、78.273±3.272、80.200±4.409,差异无统计学意义(P>0.05);p-p65蛋白相对表达量分别为:38.284±4.284、61.768±3.661、63.567±3.577,实验组细胞中p-p65蛋白表达量明显低于阴性对照组和空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。ICAM-1 蛋白相对表达量为:41.577±2.347、65.643±5.142、68.621±4.715,实验组细胞中ICAM-1相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1.MⅡP在上皮性卵巢癌组织低表达,且MⅡP蛋白阳性表达与FIGO分期和有无淋巴结转移相关。提示MⅡP的低表达可能促进了上皮性卵巢癌的发生发展。2.过表达MⅡP明显抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭能力。MⅡP可被视为卵巢癌的抑癌基因,可能成为上皮性卵巢癌治疗的潜在靶点。3.MⅡP可能通过NF-kB信号通路参与上皮性卵巢癌细胞的增殖和转移。