论文部分内容阅读
第一部分人胰腺癌细胞系成球能力及其CD44、CD24和ESA表达的研究目的研究不同人胰腺癌细胞系在特殊低粘附培养条件下的成球能力以及该培养条件对其胰腺癌干细胞标志CD44、CD24和ESA表达的影响方法采用特殊的低粘附培养条件(SFM),观察四种不同人胰腺癌细胞系(PANC-1, PC-2, MIA-Paca-2和BxPC-3)在该培养条件下形成肿瘤细胞球的能力。应用流式细胞术检测胰腺癌干细胞标志CD44、CD24和ESA在不同细胞系成球前后的变化,分析SFM培养对其CD44、CD24和ESA表达的影响结果四种人胰腺癌细胞系(PANC-1, PC-2, MIA-Paca-2和BxPC-3)口中,只有PANC-1和MIA-Paca-2在SFM培养下形成了肿瘤细胞球；在MIA-Paca-2和PC-2细胞中,只检测到CD44的表达。在PANC-1细胞中,检测到CD44和CD24的表达,而在BxPC-3中,三种标志物CD44、CD24和ESA都有表达；在PANC-1肿瘤细胞球中,CD44阳性表达率下降(85.21%±8.74%v.98.88%+2.38%,P<0.01),CD24阳性表达率上升(13.32%±6.15%v.1.22%±0.57%,P<0.01), CD24+CD44+上升(12.60%±5.10%v.1.43%±0.59%,P<0.01),在MIA-Paca-2肿瘤细胞球中,CD44阳性表达率无明显变化(99.4±0.37%v.99.43%±0.30%,P=0.919)。结论人胰腺癌细胞系PANC-1和MIA-Paca-2具有在SFM培养下形成肿瘤细胞球的能力,胰腺癌干细胞标志CD44、CD24和ESA在不同细胞系中的表达存在明显的不同,SFM培养可以引起CD44、CD24和ESA表达的变化第二部分人胰腺癌细胞系PANC-1肿瘤细胞球生物学特性及其SHH表达的研究目的鉴定人胰腺癌细胞系PANC-1肿瘤细胞球在分化、致瘤性等方面的生物学特性并检测其SHH的表达方法将PANC-1肿瘤细胞球改在有血清培养基(SCM)中进行培养,诱导其分化,通过流式细胞术分析其胰腺癌干细胞标志CD44、CD24和ESA的表达测定其分化能力。通过BALB/c-scid小鼠异种移植成瘤试验比较PANC-1肿瘤细胞球与PANC-1细胞的成瘤能力,同时采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测SHHmRNA及SHH蛋白在PANC-1肿瘤细胞球中的表达结果PANC-1肿瘤细胞球经诱导分化后,CD44+上升(94.80±4.77%v.85.21±8.74%,P<0.01),CD24+下降(1.57%±0.68% v.13.32%±6.15%,P<0.01),CD44+CD24+下降(1.55%±0.75% v.12.60%±5.10%,P<0.01),ESA-,与其来源PANC-1细胞相比,CD44、CD24和ESA的表达情况相同；在PANC-1细胞组,至少需要接种5×104个细胞才有肿瘤结节形成(1/3),而在PANC-1肿瘤细胞球组,最少接种1×104个细胞即可观察到肿瘤形成(3/3)。组织切片HE染色显微镜下观察,二者所形成移植瘤在组织结构方面无明显差异；与PANC-1细胞相比,PANC-1肿瘤细胞球细胞中SHHmRNA及SHH蛋白表达均明显升高,分别为(4.23±0.85 v.1.52±0.60,P<0.01)和(0.374±0.012 v.0.274±0.023,P<0.05)。结论PANC-1肿瘤细胞球具有肿瘤干细胞样生物学特性,其SHH表达无论在mRNA还是在蛋白水平均有明显上调第三部分肿瘤干细胞样人胰腺癌细胞在癌侵袭、转移中作用的实验研究目的研究肿瘤干细胞样人胰腺癌细胞在胰腺癌侵袭、转移中的作用并探讨其作用与上皮－间质转化(EMT)的关系方法采用Transwell小室体外迁移和侵袭实验,分别测定PANC-1肿瘤细胞球细胞在体外的运动和侵袭能力。通过BALB/c-scid小鼠脾脏移植肝转移实验测定其肝转移潜力。同时采用Western blot法分别检测E-cadherin与Vimentin蛋白在PANC-1肿瘤细胞球中的表达结果与PANC-1细胞相比,PANC-1肿瘤细胞球细胞在体外的迁移和侵袭能力明显增强,分别为(1374.6±50.15 v.521±34.63,p<0.01)和(128±7.64 v.79±17.51,p<0.05)；当接种1×105个细胞时,PANC－1肿瘤细胞球组即可查见肝转移(4/12),而在PANC-1细胞组,当接种个5×105细胞时,才有肝转移发生(2/12),当分别接种5×105,1×106,5×106个细胞时,虽然两组小鼠中都证实有肝转移发生,但是与PANC-1细胞组相比,PANC-1肿瘤细胞球组转移发生率增加,两组间差异均有显著性(p<0.05)；与PANC-1细胞相比,PANC-1肿瘤细胞球细胞中E-cadherin蛋白水平降低(0.415±0.005 v.0.504±0.006,p<0.01),Vimentin蛋白水平升高(0.504±0.005 v.0.450±0.009,p<0.01)。结论肿瘤干细胞样人胰腺癌细胞在胰腺癌侵袭、转移中发挥重要作用,其作用可能与其经历上皮－间质转化有关