(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯(R-HPBE)是合成普利类药物的关键中间体。由于普利类药物可用于治疗心血管疾病，具有不良反应小、作用时间长、疗效显著等众多优点，有着较高的市场需求，因此R-HPBE的高效合成具有较大的实用意义。R-HPBE的合成法主要分为生物法和化学法，其中利用酮还原酶直接对前体酮2-氧代-4-苯基丁酸乙酯(OPBE)进行不对称还原，是最有吸引力的方法之一。　　嗜热菌Thermotoga sp.来源的Tm是一种有较大应用潜力的酮还原酶，底物谱广而且热稳定。但是该酶在催化还原OPBE时，主要生成(S)构型产物，ee值为73％。基于此，需要对野生酮还原酶加以改造。　　首先，以野生酮还原酶Tm及其辅酶NADPH二元复合物的结构模型为模板，分析其与配体OPBE分子对接结果，在Tm底物结合区域选择21位和86位作为突变位点;然后对这2个位点分别进行饱和突变，以OPBE为底物进行筛选，获得10个有用的单突变酶（21位点3个:W21C、W21Q、W21S;86位点6个:W86A、W86E、W86H、W861、W86L、W86N、W86V)，其酶活与野生酶相当，ee值由野生酶的(S)反转成(R)，但ee值处于中等水平。基于已获得的10个具有改善性质的单突变酶，将其两两组合，构建双突变文库，同样以OPBE为底物进行筛选，最终获得6个立体选择性显著改善的双突变酶(W21Q/W86E、W21Q/W86V、W21 S/W86E、W21S/W86H、W21 S/W86I、W21 S/W86N)，其酶活基本保持不变，ee(R)值均在95％以上，其中W21 S/W86E的ee(R)值为99.7％。　　最后，对已筛选的突变酶进行了酶学性质测定。结果表明:6个双突变酶依然具有良好的热稳定性，与底物OPBE的亲和力也保持原有水平，对OPBE的催化效率比野生型酶提高了数十倍。