研究目的:阿尔茨海默病的两大病理特征是由β-淀粉样蛋白（Amyloid-β,Aβ）聚集产生的淀粉样斑块（Senile plaque,SP）和由微管相关蛋白Tau过度磷酸化并聚集形成的神经原纤维缠结（Neurofibrillary tangle,NFT）。Aβ的异常聚集是AD的早期病理改变之一,其聚集过程生成的不同大小和形态的聚集体可导致神经系统毒性,其中以寡聚体最为显著。DAPK1在AD患者的脑组织中高表达,一方面,DAPK1磷酸化APP的Thr668残基促进淀粉样生成途径;另一方面,DAPK1可增加Tau蛋白的稳定性及AD相关位点的磷酸化。但是关于Aβ42聚集体与DAPK1的作用关系及机制目前尚未有报道。本研究以Aβ42聚集体与Tau的磷酸化修饰之间的关联为切入点,探究新型蛋白激酶DAPK1在Aβ42聚集体相关的病理变化中的作用及分子机制,将为AD的病理变化及发展,以及AD的早期临床干预提供新的研究思路和候选方案。研究方法:本研究采用Aβ42为起始原料,通过调整孵育条件分别获得低分子量和高分子量Aβ42聚集体,并采用MTT方法进行细胞毒性验证。在此基础上采用台盼蓝染色方法和原位细胞死亡试剂盒考察Aβ42聚集体对神经元死亡的影响,Western blot分析细胞凋亡相关的指标和Tau的蛋白水平及AD相关位点的磷酸化水平的改变。采用Western blot和q PCR等方法考察Aβ42聚集体对DAPK1功能及活性的影响。最后,通过Western blot分析DAPK1 KO和DAPK1抑制剂对Aβ42聚集体引起的细胞凋亡、Tau积累及AD相关位点的磷酸化是否具有保护作用。研究结果:1.体外制备和表征Aβ42聚集体;2.Aβ42聚集体引起小鼠原代神经元死亡;3.Aβ42聚集体通过上调DAPK1的功能引起细胞凋亡;4.Aβ42聚集体引起Tau积累及AD相关位点的磷酸化;5.敲除DAPK1降低Aβ42聚集体诱导的细胞凋亡、Tau积累和AD相关位点的磷酸化;6.抑制DAPK1的活性改善Aβ42聚集体诱导的细胞凋亡、Tau积累和AD相关位点的磷酸化。结论:本研究通过调整孵育条件获得具有细胞毒性的低分子量和高分子量Aβ42聚集体,二者均可通过增加DAPK1的蛋白水平上调DAPK1的功能从而引起细胞凋亡、Tau积累及AD相关位点的磷酸化。DAPK1 KO以及使用DAPK1抑制剂均能改善低分子量和高分子量Aβ42聚集体引起的细胞凋亡、Tau积累及AD相关位点的磷酸化。DAPK1均在低分子量和高分子量Aβ42聚集体相关的病理变化中发挥着重要作用,可能介导了不同聚集状态的Aβ42引起的病理效应。