柽柳eIF1A基因植物表达载体的构建及功能验证

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本研究是将从抗旱、耐盐植物柽柳(Tamarix.sp)中克隆得到的eIF1A基因构建到植物表达载体pROK Ⅱ上,采用根癌农杆菌介导法进行烟草的遗传转化,获得了89株卡那霉素抗性芽,对生长较优的7个转化株系进行PCR检测和PCR-Southern印迹杂交,结果全部为阳性,通过RT-PCR和实时荧光定量PCR检测,证实eIF1A基因整合到烟草基因组中并得到表达。各转基因烟草中eIF1A基因相对于内标基因GAPDH(甘油醛-3-磷酸-脱氢酶)的表达量不同,是内标基因GAPDH的14.61倍~290.42倍。 (1)对各转基因烟草T0代分别进行了盐胁迫和干旱胁迫处理。分析了T0代转基因烟草的耐盐抗旱能力,结果显示:在NaCl浓度为240mmol/L时,各转基因烟草组培苗大部分生长良好,生根率在50%以上,盐害指数均低于57.5%,而T0代非转基因烟草对照不能生根,盐害指数高达67.7%。结果表明,转eIF1A基因烟草的耐盐性得到明显提高。在不同浓度NaCl胁迫下,转基因株系的增重均高于非转基因烟草对照,随着NaCl浓度的增加,非转基因烟草对照的生长明显减弱,而转基因烟草重量增加明显高于对照。分析了不同浓度NaCl对烟草细胞膜系统的影响,结果显示,各转基因植株的相对电导率、MDA含量均低于非转基因烟草对照,说明各转基因烟草细胞膜受到盐胁迫的伤害较小。不同浓度NaCl胁迫下SOD活性测定显示,各转基因烟草和非转基因对照的SOD活性是随着盐浓度的升高而升高,但各转基因烟草SOD活性增幅明显高于非转基因烟草对照。 对转基因烟草T0代盆栽苗分别进行干旱胁迫试验显示:在20d干旱胁迫条件下,非转基因烟草对照的旱害指数达到52.27%,转基因株系的旱害指数仅达到30.56%~46.67%。对旱胁迫10d、20d的相对电导率测定表明,各转基因烟草和非转基因对照烟草对电导率都有升高的趋势,但各转基因烟草的增幅较小;对SOD活性和可溶性蛋白含量测定表明,各转基因烟草和对照烟草均是随着旱胁迫时间的延长而升高。 (2)对各转基因烟草T1代盆栽苗分别进行了盐胁迫处理,340mmol/L NaCl胁迫下,对相对电导率、MDA含量分析表明,转基因烟草的细胞膜系统受损较对照轻。盐胁迫下各转基因烟草的SOD平均活性是非转基因烟草对照的1.17倍,各转基因烟草的盐害指数也低于非转基因对照。
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