天青蛋白与p53蛋白共同作用诱发癌细胞及耐药癌细胞凋亡

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天青蛋白是由假单胞杆菌绿毒素分泌的一种细胞蛋白,属于低分子量、可溶性的含铜蛋白,因此称其为铜蓝蛋白。以前的研究集中于天青蛋白在细胞氧化呼吸链中的作用,这种作用与其具有的氧化还原能力相关。但是最近几年发现天青蛋白可以与肿瘤抑制蛋白p53形成复合物,稳定和提高p53在胞内的水平,同时产生高水平的活性氧ROS,由此导致细胞凋亡。已有文献报道azurin能够抑制裸鼠网状瘤J774巨噬细胞增殖,诱导黑色素瘤UISO-Mel-2细胞及人乳腺癌的MCF-7细胞凋亡。 为了解天青蛋白对中国人的口腔癌细胞及顺铂(DDP)耐药细胞的作用,本研究成功利用大肠杆菌表达系统高效表达了绿脓杆菌氧化还原蛋白天青蛋白,采用两种方法分别纯化得到了纯度较高的可溶性天青蛋白,以变性丙稀酰胺电泳和FPLC系统检测其纯度,在理化性质上给予表征,将其作用于乳腺癌MCF-7细胞,检测天青蛋白的促凋亡能力和细胞毒性,证实其细胞毒活性。而后我们将天青蛋白作用于可以表达野生型p53蛋白的两种口腔癌细胞Acc2,Acc3,并通过MTT毒性实验,流式细胞检测细胞凋亡实验和琼脂糖凝胶电泳研究其促进细胞凋亡的作用,同时通过免疫印记实验考察其与p53的相互作用。结果表明,天青蛋白的加入稳定和提高了细胞内p53的表达,对口腔癌细胞产生了明显的生长抑制和诱导凋亡作用。进一步的实验证实其对顺铂(DDP)耐药的A549肺癌细胞的凋亡也起到很明显的促进作用。这揭示了azurin在肿瘤生物治疗方面的应用前景,为进一步研究其生物功能及在治疗肿瘤方面尤其是在耐药肿瘤细胞治疗的应用提供了依据。
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