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先天免疫是生物体在发育的长期过程中建立起来的一系列天然保护能力,它提供了一种可以迅速阻碍病毒感染和传播的屏障。环指蛋白11(RNF11)为RING-finger (Really Interesting New Gene)家族成员之一,属于E3泛素连接酶家族成员,在人的抗病毒通路中发挥着重要的作用,RNF11是否也在鸡的免疫抗病毒过程发挥相同的作用,参与炎症反应的调节,目前还没有相关报道。本试验首先通过克隆鸡RNF11基因CDS区,并进行序列分析和蛋白相关特性的预测;其次对1日龄SPF鸡腹腔注射禽白血病病毒(ALV-J),利用定量PCR技术检测RNF11以及干扰素IFN-a和IFN-β基因在14、21、28和35日龄鸡法氏囊、脾脏和胸腺中的表达;最后,通过构建RNF11基因的过表达载体和干扰载体并转染到鸡成纤维细胞,分析转染后的24和28小时(hps),RNF11对IFN-β基因表达的影响,进一步验证RNF11在鸡抗病毒通路上的作用,进一步检测炎性因子IL2和IL10基因的表达,初步探讨RNF11对炎症反应的影响。试验结果如下:1)通过分析克隆所得鸡RNF11基因的CDS区序列,得到了一段长度为465bp,共编码154个氨基酸的序列。蛋白分析发现,其为非跨膜的疏水性蛋白,蛋白分子量为17.4156kDa,共有9个磷酸化位点,属于RING-finger (Really Interesting New Gene)家族,可能参与细胞核和细胞质中的泛素化作用。2)禽白血病感染1日龄的SPF鸡后,在法氏囊、脾脏和胸腺三个组织中,ALV-J基因的表达量在21日龄时最高,病毒复制的拷贝量最大,且表达趋势基本一致。在法氏囊中,ALV-J引起RNF11,IFN-α和IFN-β基因的表达量在四个时间点都显著(p<0.05)或者极显著(p<0.01)的上调;在脾脏中,RNF11基因的表达量在14和21日龄时极显著(p<0.01)升高,但在35日龄差异不显著,除IFN-β在21日龄时表达差异不显著外,IFN-α和IFN-β基因的表达量都是显著或者极显著高于对照组的;同样在胸腺组织中,ALV-J诱导RNF11在14、21和28日龄显著或极显著表达,除IFN-β基因在35日龄表达差异不显著外,IFN-α和IFN-β都是是显著或者极显著的高于对照。说明ALV-J可刺激机体干扰素基因表达的上调,引起了机体的抗病毒反应,RNF11基因的表达升高,预示了其在鸡机体内的抗病毒通路上发挥着作用。3)在ALV-J的刺激下,通过对鸡成纤维细胞转染RNF11基因的过表达载体和干扰载体,发现过表达RNF11基因24和28小时(hps)后,IFN-β基因的表达量极显著(p<0.01)降低,而干扰RNF11基因表达后,IFN-β基因的表达量在两个时间点都是极显著高于对照组,结果证明了RNF11在鸡成纤维细胞中下调干扰素物质的产生,抑制抗病毒通路,在先天免疫中负调节通路。此外,过表达RNF11基因可上调炎症因子IL2和IL10基因的表达,而干扰RNF11基因后,其表达量则显著(p<0.05)下降,初步揭示了RNF11基因在炎症反应中扮演着重要的角色。