蜱传森林脑炎病毒(TBEV)荧光定量PCR检测方法的建立与应用

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:sunna2005
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蜱传脑炎(TBE)又称森林脑炎,是由森林脑炎病毒(TBEV)经蜱媒介传播所导致的大脑中枢神经性疾病,TBEV隶属于黄病毒科、黄病毒属。犬、羊、牛、马等家畜均为该病的传播宿主。蜱叮咬健康的家畜,病毒随着蜱的唾液流进家畜的血液使其患病,还会直接或间接的将病毒传染给人群。人一旦感染上该病毒,重者会出现高烧、意识模糊、四肢肌肉瘫痪及脑膜刺激征等病症,对生命健康构成极大威胁。因此本研究旨在建立一种对TBEV成本低且快速精准的检测方法,为蜱传病防控奠定基础。TBEV荧光定量PCR检测方法的建立。成功制备了TBEV标准品,确定了反应条件和反应体系。对获得的标准品进行荧光定量检测后成功建立标准曲线,且相同稀释梯度间变异系数均低于2%,表明此方法稳定性良好。将标准质粒按(10~8拷贝/μL~10~1拷贝/μL)梯度稀释,进行荧光定量PCR和半巢式PCR检测并比较其敏感性,结果显示,荧光定量PCR检测下限可达10~1拷贝/μL,灵敏度比半巢式PCR高10倍。选用沙粒病毒(LCMV)、发热板血小板(SFTSV)和TBEV毒株进行荧光定量PCR检测,结果显示,仅TBEV出现特异性扩增,其它毒株均不能产生扩增,表明此方法特异性良好。TBEV荧光定量PCR检测方法的应用。对在内蒙古地区采集的155份牛血清样本进行荧光定量PCR检测和半巢式PCR检测。结果显示,155份牛血清样本里荧光定量PCR检测出阳性样本22份,阳性率为14.19%,半巢式PCR检测出阳性样本14份,阳性率为9.03%,两者一致率为63.64%,经测序结果显示36份阳性样本均感染TBEV。证明此方法检测敏感性强,可应用于TBEV的临床诊断及病原的定量分析。综上所述,此方法的建立为TBEV的流行病学调查及医学诊断提供了理论依据和技术和支持。
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