【摘 要】
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目的:探讨槲皮素联合顺铂对A549细胞的细胞增殖、周期阻滞、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:1.用不同浓度槲皮素（0、20、40、80、160、320μmol/L）、顺铂（0、20、40、80、160、320μmol/L）作用于A549细胞在不同时间点（12h、24h、48h、72h）,采用CCK-8试剂盒检测各处理组细胞增殖率,并选择适宜的作用时间及浓度。2.根据CCK-8实验结果绘制细胞增
【基金项目】
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遵义市科技局基金项目（项目编号:遵市科合HZ字（2021）271号）
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目的:探讨槲皮素联合顺铂对A549细胞的细胞增殖、周期阻滞、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:1.用不同浓度槲皮素（0、20、40、80、160、320μmol/L）、顺铂（0、20、40、80、160、320μmol/L）作用于A549细胞在不同时间点（12h、24h、48h、72h）,采用CCK-8试剂盒检测各处理组细胞增殖率,并选择适宜的作用时间及浓度。2.根据CCK-8实验结果绘制细胞增殖曲线,选取对A549细胞具有杀伤作用的顺铂药物浓度,同时选用对A549细胞无明显抑制作用的槲皮素药物浓度进行后续试验。3.观察对照组、单用槲皮素组、单用顺铂组及槲皮素联合顺铂组在不同时间点的细胞增殖、凋亡、周期阻滞等作用。使用流式细胞仪术检测细胞凋亡率及周期阻滞作用。4.WB检测各处理组凋亡蛋白Bcl-2、Bax及内质网应激相关蛋白水平GRP78、CHOP、caspase-12、p-PERK、ATF6、p-IRE1的蛋白水平。结果:1.槲皮素对A549细胞具有浓度-时间依赖性杀伤作用,随着浓度的增加,细胞增殖率逐渐降低;同时随着作用时间的增加,同一浓度的细胞增殖率逐渐降低;同理顺铂对A549细胞也具有浓度-时间依赖作用。2.在槲皮素组,12h处理组在浓度160μmol/L处有抑制作用,在24h、48h细胞生长在浓度≥40μmol/L时增殖被显著抑制,然而在72h浓度20μmol/L即有毒性作用。在顺铂处理组,12h组,仅在320μmol/L具有抑制作用,在24h、48h细胞生长在顺铂浓度≥80μmol/L时被显著抑制,在72h时20μmol/L即有毒性作用。Hoechst33342荧光染色显示,随着槲皮素、顺铂药物浓度升高,细胞数量逐渐减少,且细胞形态变圆,凋亡细胞比例增高,表明槲皮素、顺铂对A549细胞具有明显的抗肿瘤效应。因此,为排除槲皮素对细胞毒性作用的干扰,选择槲皮素20μmol/L、顺铂80μmol/L以及24h、48h进行后续联合试验。3.细胞暴露于对照组、单独槲皮素组（20μmol/L）、单独顺铂组（80μmol/L）、联合处理组（槲皮素20μmol/L+顺铂80μmol/L）在24h及48h。槲皮素联合顺铂作用于A549细胞明显降低了其增殖率,48h时作用更显著,表明槲皮素联合顺铂可增加细胞毒性作用。使用流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果显示,与对照组相比,槲皮素联合顺铂组明显增加了细胞的凋亡率,48h效果明显。使用流式细胞仪检测细胞周期,与对照组相比,槲皮素联合顺铂组处理组的S期、G2/M期比例增加,G0/G1期减少,在48h处理组效果尤甚。这一结果表明,槲皮素联合顺铂可使细胞周期阻滞在S、G2/M期,进而抑制细胞增殖率。4.Western Blot结果显示,与对照组相比,槲皮素联合顺铂组明显降低了Bcl-2蛋白水平,增加了Bax蛋白表达量。同时,槲皮素联合顺铂组增加了内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP、caspase-12的蛋白水平。此外,槲皮素联合顺铂也增加了ATF6、IRE1蛋白水平,而对PERK蛋白无明显影响。结论:槲皮素、顺铂对非小细胞肺癌A549细胞具有抗肿瘤效应,且槲皮素可增强A549细胞对顺铂化疗的敏感性,其机制可能是诱导内质网应激,激活ATF6、IRE1信号转导通路进一步诱导凋亡。
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