体外RNA干扰抑制REG4基因表达对胃癌细胞生物学行为的影响

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目的:再生基因4(REG4,Regenerating islet-derived family, member4)是由17496个碱基对构成的,包含6个外显子和5个内含子,定位于1p12-13.1。其编码分泌型小蛋白RegⅣ,又称为再生蛋白样蛋白(reg-like protein, RELP)。已有研究表明,REG4在胃癌、结直肠癌及胰腺癌等多种胃肠道肿瘤中异常表达。本实验的目的是研究体外RNA干扰抑制REG4基因表达对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:为了进一步明确REG4表达水平与胃癌细胞生物学行为之间的关系,我们针对REG4基因设计三条小干扰RNA片段(siRNA1、siRNA2、siRNA3),瞬时转染高表达胃癌细胞株,获得了在胃癌细胞系AGS中沉默REG4表达的细胞。系统分析了干扰胃泌素表达对细胞恶性增殖能力、凋亡率以及迁移和侵袭能力的影响。结果:实验结果显示siRNA2、siRNA3均有干扰效果,尤以siRNA3效果明显。选用siRNA3干扰AGS细胞株,MTT实验结果证实干扰REG4基因后,AGS细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪检测到干扰REG4基因后AGS细胞凋亡率明显增加(P<0.05);划痕实验表明干扰REG4的细胞向划痕处迁移的速度减慢;Transwell小室侵袭实验表明干扰REG4的细胞穿过基质胶的数量明显减少(P<0.05)。结论:以上结果表明,REG4基因能够促进胃癌细胞的增殖能力、抗凋亡能力以及迁移和侵袭能力,而干扰REG4基因具有抑制胃癌细胞增殖、促进凋亡的作用,同时能明显抑制其迁移和侵袭,因此REG4基因可能成为胃癌基因靶向治疗的新靶点。
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