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目的:RP105重组腺病毒载体在体感染大鼠心肌细胞,研究RP105调控TLR4/TRIF信号通路对心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其分子机制,为基因治疗MIRI提供理论依据。方法:本实验采用SPF级雄性SD大鼠(220-250g)40只,随机分为4组(n=10):(1)生理盐水+假手术(Sham组);(2)生理盐水+IR(IR组);(3)Ad-EGFP-RP105+IR(Ad-RP105组);(4)Ad-EGFP+IR(Ad-EGFP组)。将构建的携带RP105的重组腺病毒载体(Ad-EGFP-RP105)、空载病毒(Ad-EGFP)或生理盐水在体感染大鼠心肌,稳定感染3天后通过结扎冠状动脉左前降支构建MIRI模型(缺血30min再灌注2h)。免疫荧光观察腺病毒感染大鼠心后目的基因RP105在心肌细胞的表达情况;血生化分析测定血清心肌酶LDH和CK-MB水平;Evans blue/TTC双染法检测大鼠心肌梗死面积;HE染色观察大鼠心肌组织形态;ELISA监测大鼠心肌炎症因子IFN-β和TNF-α的水平;Western检测大鼠心肌TLR4/TRIF信号通路相关蛋白表达情况;PCR检测大鼠心肌TLR4/TRIF信号通路相关基因表达情况;EMSA检测大鼠心肌核转录因子IRF3的DNA结合活性。结果:(1)RP105重组腺病毒载体成功感染心肌组织,并且RP105成功表达至心肌细胞。(2)与Sham组相比,IR组血清心肌酶LDH和CK-MB的表达水平显著升高(P<0.05);Ad-RP105组的LDH和CK-MB的表达水平较IR组或Ad-EGFP组明显下降(P<0.05)。(3)与Sham组相比,IR组心肌梗死面积显著增加(P<0.05);Ad-RP105组心肌梗死面积较IR组或Ad-EGFP组明显减少(P<0.05)。(4)与Sham组相比,IR组可见细胞变性、细胞坏死等病理改变;Ad-RP105组心肌细胞变性坏死较IR组或Ad-EGFP组得到改善。(5)与Sham组相比,IR组心肌组织炎症因子IFN-β和TNF-α的表达水平显著升高(P<0.05);Ad-RP105组的IFN-β和TNF-α的表达水平较IR组或Ad-EGFP组明显下降(P<0.05)。(6)与Sham组相比,IR组TLR4/TRIF信号通路相关蛋白TRIF、TBK-1、IRF3、p-IRF3的表达显著上调(P<0.05);Ad-RP105组上述蛋白表达水平较IR组或Ad-EGFP组明显下调(P<0.05)。(7)与Sham组相比,IR组TLR4/TRIF信号通路相关基因TRIF、TBK-1、IRF3的表达显著上调(P<0.05);Ad-RP105组上述基因表达水平较与IR组或Ad-EGFP组明显下调(P<0.05)。(8)心肌缺血再灌注处理显著增加核转录因子IRF3的DNA结合活性,RP105对IRF3的DNA结合活性有一定的抑制作用。结论:(1)TLR4/TRIF/IRF3信号通路在MIRI的发生发展中起到了重要的推动作用,参与缺血再灌注心肌细胞的炎症损伤过程。(2)通过腺病毒感染的方式使目的基因RP105在心肌细胞中过表达,发现可抑制TLR4/TRIF/IRF3信号通路,降低炎症因子的释放水平、减轻心肌梗死情况、减少心肌酶释放,来缓解大鼠心肌缺血再灌注损伤。(3)RP105作为干预MIRI的有效靶点,结合基因治疗有望成为MIRI治疗的有效措施,为临床冠心病患者血运重建中再灌注损伤的防治提供理论依据。