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目的:探讨ADAM-17与肿瘤化疗耐药机制的相关性，阐明肠胃清方(CWQ)逆转奥沙利铂(L-OHP)化疗耐药的分子机制。本实验采用RealTime PCR方法检测耐药细胞株和敏感细胞株中ADAM-17mRNA表达的差异，进而通过FCM检测肠胃清对肿瘤细胞凋亡的影响，最终通过Western Blot检测肠胃清对ADAM-17、BCL-2蛋白表达的影响的方法来揭示肠胃清方逆转人结肠癌HCT116/L-OHP化疗耐药细胞的分子机制，为肠胃清方在临床上的应用提供理论依据。 方法:1.RealTime PCR法检测ADAM-17mRNA在敏感细胞与耐药细胞中表达的差异:将人结肠癌敏感细胞株HCT116和人结肠癌奥沙利铂耐药细胞株HCT116/L-OHP进行体外常规培养，分别提取两组细胞内总RNA，配制RT反应液进行RNA反转录，用荧光定量基因扩增仪采用两步法PCR扩增程序进行扩增，进而检测ADAM-17mRNA的表达水平。2.FCM法检测肠胃清对肿瘤细胞凋亡的影响:实验分6组:空白组，化疗组，ADAM-17抑制剂组，化疗+ADAM-17抑制剂组，肠胃清组，化疗+肠胃清组，各组分别作用于HCT116/L-OHP耐药细胞48小时，PBS缓冲液洗涤离心收集细胞两次，加入400μl结合缓冲液悬浮细胞，加入5μl Ca依赖性磷脂结合蛋白混匀后，加入碘化丙啶，4℃反应5min后采用流式细胞仪检测耐药细胞凋亡率。3.Western Blot法检测肠胃清对凋亡相关蛋白ADAM-17和BCL-2细胞蛋白质表达的影响:实验分为4组:空白组，化疗组，肠胃清组，化疗+肠胃清组，每组分别作用于HCT116/L-OHP耐药细胞后，进行单层贴壁细胞总蛋白的提取，用1mg/mL胎牛血清蛋白制作标准曲线，设定空白样品分别测定各组内两种蛋白的含量，最后进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、转膜、免疫反应、显影定影及图像分析等步骤。 结果:1.RealTime PCR检测发现与HCT116敏感细胞株相比较，ADAM-17在HCT116/L-OHP耐药细胞株高表达，差异具有统计学意义(P＜0.001)。2.FCM检测发现与化疗组比较，化疗+ADAM-17抑制剂组耐药细胞凋亡率明显上调，差异具有统计学意义（P＜0.01）;与化疗组比较，化疗+肠胃清组耐药细胞凋亡率亦明显上调，差异具有统计学意义(P＜0.001)。3.Western Blot检测方法证明，与化疗组比较，ADAM-17在化疗+肠胃清组的蛋白表达明显下调（P＜0.01），BCL-2在化疗+肠胃清组的蛋白表达也明显下调(P＜0.001)。 结论:1、ADAM-17高表达可能与结肠癌细胞化疗耐药的发生有关。2、ADAM-17抑制剂能够协同L-OHP促进结肠癌耐药细胞发生凋亡，肠胃清方能够逆转结肠癌化疗耐药的发生。3.肠胃清逆转化疗耐药的分子机制可能与其下调ADAM-17、BCL-2蛋白表达有关。