中国淡水涡虫分类学及分子系统学研究

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利用整体染色切片法对鲍恩氏液固定的淡水涡虫进行分类学研究,于山西省阳城县发现多目涡虫属一新种: 阳城多目涡虫,新种Polycelis yangchengensis sp.nov. 本种充分性成熟个体体长12—17mm,体宽1.5—2.5mm,总眼点数80—100只,组成“八”字形的两条眼带,前肠干有6—10条侧分枝,每一后肠干有12—16条侧分枝。该种精巢特别发达,数目多且体积大,由腹侧直达背侧。卵巢一对,中等大小,为实质性的组织块,位于前肠干第2—3侧分支之间的腹侧,与精巢在前端的位置相当。因此,在横切、矢状切和水平切面上可同时看到精巢与卵巢。交配器官的特征为:阴茎尖锥状,由一个强肌肉质的阴茎球和一个强肌肉质的尖锥形乳突组成。阴茎乳突背唇与腹唇对称,无球腔。交配囊椭圆形或近方形,位于咽和阴茎球之间。交配囊柄两端粗,中间细长,周围覆以发达的环肌。标本采自山西省阳城县城墙根及人鼻沟涌泉。模式标本保存于河南师范大学生命科学学院动物标本室。 用购自上海生工生物工程公司的基因组抽提试剂盒提取采自河南省鲁山县二郎庙的三角涡虫(Dugesia japonica.)基因组DNA,依据Williams et al(1990)的反应条件,对影响淡水涡虫RAPD分析结果的重要因素,如模板DNA浓度、退火温度、引物浓度、Mg2+及dNTP浓度等进行了优化。通过比较得出了淡水涡虫RAPD分析的最适条件:对于25μl反应体系,最适模板量20ng,最适退火温度37℃,最适引物浓度0.21xmol/L,最适Mg2+及dNTP浓度分别为2.0mmol/L和200μmol/L。 从80个10碱基随机引物中筛选出36个引物,用其中的27个引物,根据上述优化条件对浙江杭州午潮山等中国九产地淡水涡虫进行RAPD分析,共扩增出了314条谱带,其中多态性谱带312条,多态率为99%,遗传距离变幅为0.2863—0.7545。用SPSS统计软件中的Nearest Neighbour(最近邻居法)聚类做出系统树状图,结果表明:河南省修武县云台山、山西省阳城县委员后及河南省济源市石家背三产地淡水三角涡虫的亲缘关系较近。河南省鲁山县二郎庙、新县沙石、栾川县庙子三产地淡水三角涡虫的亲缘关系较近。它们和北京樱桃沟、杭州午潮山三角涡虫的亲缘关系较远。而采自河南省鲁山县的中华绥氏涡虫和其它八产地的三角涡虫亲缘关系最远。
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