125I粒子放疗联合热疗作用于体外培养的Tca8113及ACC细胞的研究

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目的探讨125Ⅰ粒子、热疗以及二者联合运用导致体外培养人舌鳞癌(Tca8113)细胞、人涎腺腺样囊性癌(ACC-M)细胞的凋亡的作用,探讨125Ⅰ放疗联合热疗杀伤人舌鳞癌细胞及人腺样囊性癌细胞运用的最佳方式,为二者治疗口腔鳞癌及涎腺腺样囊性癌提供理论依据。方法将Tca8113细胞、ACC-M细胞以5×105/ml密度接种于6孔板中,待细胞贴壁后,接受1251粒子照射或/和43℃水浴加热,72小时后收集细胞,进行各项检测。用放射活度为0.8mCi的1251粒子建立体外照射装置:六孔板每孔板顶、板底中心处各放置125Ⅰ粒子一枚。实验分组:空白对照组(Tca8113、ACC-M细胞正常培养)、实验组一(125Ⅰ+加热处理Tca8113细胞);组二(125Ⅰ处理Tca8113细胞);组三(加热处理Tca8113细胞);组四(125Ⅰ+加热处理ACC-M细胞):组五(1251处理ACC-M细胞);组六(加热处理ACC-M细胞)。倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化。流式细胞仪TUNEL法检测各组细胞的凋亡率及细胞周期。免疫细胞化学染色分析各组细胞Bcl-2及Bax蛋白的表达情况。所有数据采用SPSS17.0统计软件包进行统计学分析,计数资料数据采用秩和检验分析检验。结果1.倒置显微镜下观察各组处理后24h的形态学改变:经过125Ⅰ或/和加热处理后Tca8113细胞变圆、皱缩,生长缓慢,分布不均匀;ACC-M细胞及细胞核体积缩小,细胞间排列疏松,细胞呈浮起状。热放疗联合组与放疗组、加热组相比较,细胞形态变化更加明显。2.流式细胞术检测显示,Tca8113各组细胞处理72h后,与对照组比较,放疗组、加热组、热放疗联合组细胞凋亡率明显升高,差别有统计学意义。除放疗组与加热组之间p=0.513外,各实验组之间差别均有统计学意义。从细胞周期的改变上来看,与对照组比较,各实验组细胞表现为明显的G2/M期阻滞;各组ACC-M细胞处理72h后,与对照组比较,放疗组、加热组、热放疗联合组细胞凋亡率明显升高,差别有统计学意义。从细胞周期的改变上来看,与对照组比较,各实验组细胞也均表现为明显的G2/M期阻滞;两种细胞的各实验组之间分别比较,除了加热组之间p=0.817外,放疗组、热放疗组之间差别均有统计学意义。3.免疫细胞化学染色分析各组Tca8113细胞和ACC-M细胞处理72h后Bcl-2及Bax的表达情况为:经过1251照射或/和加热处理后,Tca8113细胞和ACC-M细胞中Bax表达均增强,Bcl-2表达均减弱;热放疗联合组与放疗组、加热组相比较,Bax和Bcl-2表达的改变最为显著。结论1.1251或/和加热均可以诱导Tca8113细胞和ACC-M细胞的凋亡,二者联合使用对上述癌细胞的凋亡具有协同增敏作用。2.1251照射72小时及43℃加热80min对Tca8113细胞和ACC-M细胞周期的影响主要表现为G2/M期阻滞。3.125I放疗与热疗同时联合使用对ACC-M细胞的致凋亡作用强于Tca8113细胞。
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