目的：研究注射用银杏叶提取物冻干粉针的性状、鉴别、检查、含量测定等方法，为其质量标准的制定奠定基础。 方法： 1.性状：根据三批样品的实际性状描述。 2.鉴别：采用薄层色谱法分别鉴别银杏叶中的化学成分。 3.检查：分别检查pH值、黄酮苷元峰面积比、水分、蛋白质、鞣质、热原、炽灼残渣、重金属、砷盐、装量差异以及无菌检查。 4.含量测定：用高效液相色谱法分别测定银杏叶中总黄酮醇苷和萜类内酯的含量。 (一）总黄酮醇苷的含量测定 (1)色谱条件的确定：选用合适的色谱柱，调整流动相的配比，使各待测成分色谱峰的分离度均符合测定的要求。 (2)系统适用性试验：在已确定的色谱条件下，考察色谱图中各待测物峰的分离度，按槲皮素峰计算理论板数。 (3)方法学考察：①专属性试验：精密吸取阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液，进样，记录色谱图。②标准曲线的制备：配制一系列浓度的混合对照品溶液，测定峰面积；以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线，经回归处理得各标准曲线方程。③检测限：将混合对照品溶液逐步稀释，当信噪比S/N≥3时确定为检测限。④重复性试验：取同一样品6份，制备供试品溶液，进样测定。⑤精密度试验：取同一份样品溶液，重复进样6次，测定峰面积。⑥稳定性试验：取样品溶液分别于0、2、4、6、8、24h进样测定。⑦回收率试验：取已知含量的样品6份，精密称定，分别精密加入一定量的对照品，制备供试品溶液，进样测定。 (4)样品测定：取样品10批分别制备供试品溶液，进样测定，计算含量。 (5)含量限度的确定：根据10批样品的含量测定结果，初步制定本品每支样品中总黄酮醇苷的最低含量限度。 (二)萜类内酯的含量测定 (1)色谱条件的确定：选用合适的色谱柱，调整流动相的组成、配比、流速，使各待测成分色谱峰的分离度均符合测定的要求。 (2)系统适用性试验：在已确定的色谱条件下，考察色谱图中各待测物峰的分离度，按白果内酯峰计算理论板数。 (3)方法学考察：①专属性试验：精密吸取阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液，进样，记录色谱图。②标准曲线的制备：配制一系列浓度的混合对照品溶液，测定峰面积；以峰面积对数为纵坐标，以浓度对数为横坐标，绘制标准曲线，经回归处理得各标准曲线方程。③检测限：将混合对照品溶液逐步稀释，当信噪比S/N≥3时确定为检测限。④重复性试验：取同一样品6份，制备供试品溶液，进样测定。⑤精密度试验：取同一份样品溶液，重复进样6次，测定峰面积。⑥稳定性试验：取样品溶液分别于0、2、4、6、8、24h进样测定。⑦回收率试验：取已知含量的样品6份，精密称定，分别精密加入一定量的对照品，制备供试品溶液，进样测定。 (4)样品测定：取样品10批分别制各供试品溶液，进样测定，计算含量。 (5)确定含量限度：根据10批样品的含量测定结果，初步制定本品每支样品中萜类内酯的最低含量限度。 结果： 1.性状：本品为浅黄色至棕褐色无定形粉末或疏松固体状物；味微苦；有引湿性。 2.鉴别：成功地对银杏叶、萜类内酯进行了薄层鉴别。 3.检查：三批样品的pH值为4.92、4.97、4.99；黄酮苷元峰面积比为：1.08、1.10、1.10；水分测定结果为：3.2、3.7、3.9；蛋白质检查未出现混浊；鞣质检查未出现混浊；热原检查符合规定；炽灼残渣每1ml小于0.5mg；重金属检查结果小于百万分之十；砷盐检查结果小于百万分之二；装量差异在-2.94％～+1.89％；无菌检查符合规定。 4.含量测定： （一）总黄酮醇苷的含量测定：(1)色谱条件：采用C18色谱柱，以甲醇-0.4％磷酸溶液(50:50)为流动相，于360nm处检测。(2)系统适用性试验：在此色谱条件下，各待测组分与其相邻色谱峰的分离度均在2.0以上，以槲皮素峰计算理论板数大于6500。(3)方法学考察：①专属性试验：空白辅料的色谱峰对供试品溶液中各色谱峰无干扰。②标准曲线的制备：槲皮素、山柰素和异鼠李素的回归方程分别为Y=92806X-37700，r=0.9999，(n=5)；Y=83241X+6600，r=0.9998，(n=5)；Y=101113X-1800，r=0.9998，(n=5)。线性范围分别为19.32μg/ml～45.08μg/ml；19.26μg/ml～44.94μg/ml；4.44μg/ml～10.36μg/ml。③检测限：槲皮素为5.41ng、山柰素为8.62ng、异鼠李素为12.32ng。④重复性试验：方法的重复性良好，平均含量4.91mg/支，重复性的RSD为0.26％。⑤精密度试验：方法的精密度良好，精密度的RSD均小于1％。⑥稳定性试验：供试品溶液在24h内基本稳定，RSD均小于1％。⑦回收率试验：平均回收率均在99.00％～100.00％，RSD均小于1％。(4)样品测定：依据上述色谱条件进行分析，由外标一点法计算得到各个样品中各待测组分的含量。(5)含量限度：根据10批样品的含量测定结果，暂定本品每支样品中总黄酮醇苷不得少于4.2mg。 (二)萜类内酯的含量测定：(1)色谱条件：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相梯度洗脱，蒸发光检测器检测。(2)系统适用性试验：在此色谱条件下，各待测组分与其相邻色谱峰的分离度均大于2.0，以白果内酯峰计算理论板数大于5000。(3)方法学考察：①专属性试验：空白辅料的色谱峰对供试品溶液中各色谱峰无干扰。②标准曲线的制备：白果内酯和银杏内酯A、B、C回归方程分别为Y=1.4625X+5.3955，r=0.9995，(n=5)：Y=1.5352X+5.1375，r=0.9998，(n=5)；Y=1.509X+4.8123，r=0.9999，(n=5)；Y=1.2607X+5.1248，r=0.9997，(n=5)；线性范围分别为9.49μg/ml～22.15μg/ml、0.669μg/ml～3.345μg/ml、0.67lμg/ml～3.355μg/ml和0.387μg/ml～1.935μtg/ml。③检测限：白果内酯、银杏内酯A、B、C的检测限分别2.52ng、5.12ng、3.57ng、4.25ng。④重复性试验：方法的重复性良好，平均含量为1.929mg/支，相对标准偏差为0.70％。⑤精密度试验：方法的精密度良好，精密度的RSD均小于1％。⑥稳定性试验：供试品溶液在24h内基本稳定，其RSD均小于1％。⑦回收率试验：平均回收率均在98.00％～100.00％，RSD均小于1％。(4)样品测定：依据上述色谱条件进行分析，由外标两点对数法计算得到各个样品中各待测组分的含量。(5)含量限度：根据10批样品的含量测定结果，暂定本品每支样品中萜类内酯不得少于1.05mg。 结论：描述了注射用银杏叶提取物冻干粉针的性状；三批样品的pH值、黄酮苷元峰面积比、水分、蛋白质、鞣质、热原、炽灼残渣、重金属检查、砷盐检查、装量差异、无菌检查等均符合规定；成功地对银杏叶、萜类内酯进行了薄层鉴别；对注射剂中的总黄酮醇苷和萜类内酯分别进行了含量控制。为注射用银杏叶提取物冻干粉针提供了准确、可靠的检测方法。