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目l的：本研究采用腹膜透析管-透析后无菌腹膜透析液系统在体外建立大肠杆菌(Escherichia coli, E.coli)生物被膜(biofilm, BF)的模型,为下一步研究药物对其干预作用提供模型支持。方法：(1)采用刚果红平板法初步鉴定临床分离的E.coli菌株能否形成BF。(2)采用腹膜透析管为载体,透析后无菌腹膜透析液为培养液,在24孔板中建立E.coli BF体外静置模型。培养1d至7d后,分别用连续稀释法进行BF内活菌菌落计数,于1d、3d、7d银染后普通显微镜(简称银染法)和扫描电子显微镜(scanning electron microscopy, SEM)观察腹膜透析管上E.coli BF的情况。结果：(1)该临床分离的E.coli菌落变黑,菌落周边培养基褪色。(2)腹膜透析管上的细菌菌落数1d至7d逐渐增多。培养1d银染法观察载体上可见小团块状,散在黑色棉絮样物；SEM观察可见细菌及黏液样物黏附成团,呈云雾状,即早期BF。培养3d银染法观察可见较1d增多增大的黑色棉絮样；SEM观察可见细菌及黏液样物较培养1d增多,更密集。培养7d银染法可见更密集、体积更大,呈大片状、团块状致密黑色棉絮状样物；SEM观察可见细菌及细菌间黏液样物质更加密集、更厚实,且形成具有三维立体结构膜样物,即形成成熟的BF。结论：(1)初步鉴定该临床分离的E.coli菌株为BF形成阳性菌株,且在体内外均能形成BF。(2)采用腹膜透析管-透析后无菌腹膜透析液系统成功建立了E.coli BF体外静置模型,1d形成早期E.coli BF,7d形成成熟E.coli BF。目的：本研究通过建立成熟E.coli BF后,药物作用成熟E.coli BF,旨在探讨单用头孢他啶、克拉霉素和头孢他啶联合对腹膜透析管上成熟E.coli BF的体外干预作用。方法：(1)分别检测克拉霉素和头孢他啶对临床分离E.coli的最低抑菌浓度(the minimum inhibitory concentration, MIC)和最低杀菌浓度(the minimum bactericidal concentration, MBC)。(2)建立成熟E.coli BF模型后,实验一研究单用不同浓度头孢他啶对成熟E.col BF作用,实验二研究克拉霉素和头孢他啶联合作用成熟E.col BF。两部分实验药物作用12h后,分别用连续稀释法进行BF内活菌菌落计数,银染法和SEM观察各组腹膜透析管上BF的变化。结果：(1)克拉霉素对临床分离E. coli的MIC>256μg/ml;头孢他啶的MIC为0.5μg/ml, MBC为8μg/ml。(2)与对照组比较,高浓度头孢他啶(1×MBC)能明显减少成熟}E.coli BF内活菌菌落数(P<0.01),且银染法和SEM观察可见高浓度组(1×MBC)与对照组、低浓度组(1×MIC)比较BF明显减少；而低浓度组与对照组比较无明显改变。(3)头孢他啶组(1×MBC)、克拉霉素(1/4×MIC)和头孢他啶(×MBC)联合组(简称联合组)中BF内活菌菌落数均少于对照组,且联合组更少(P<0.01)。银染法和SEM观察均显示头孢他啶组、联合组与对照组比较,腹膜透析管上BF减少,且联合组BF减少更明显。结论：(1)单用高浓度头孢他啶能减少成熟E.coli BF内活菌菌落数,且能破坏BF,但清除不完全。(2)克拉霉素和头孢他啶联合作用可显著增强头孢他啶对成熟E.coli BF的破坏和清除作用。