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目的:研究谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidas 1,GPx1)在调控肺腺癌A549微球体细胞及A549细胞增殖和凋亡中相关蛋白的表达及作用,并探讨其可能的机制。方法:1.采用无血清悬浮法培养法,诱导亲本A549细胞形成A549微球体细胞,采用流式细胞术检测A549微球体细胞中CD133+、CD44+细胞的水平,应用蛋白质印迹法检测A549微球体细胞中干细胞标志物Y染色体上的性别决定区2(sex determining region Y-box 2,Sox2)和Nanog同源蛋白(Nanog homeobox,Nanog)的表达情况,以及GPx1蛋白的表达水平。2.用5 mg/ml顺铂(cisplatin,DDP)分别处理A549微球体细胞和亲本A549细胞,用CCK-8法检测48 h内细胞的存活率。利用比色法检测A549微球体细胞和亲本A549细胞中谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量和GPx1的活性以及蛋白质印迹法检测GPx1蛋白的表达。3.FCM检测A549微球体细胞和A549细胞中ROS水平。将特异性针对GPx1基因的GPx1-siRNA转入A549微球体细胞中,分别用PCR和蛋白质印迹法检测GPx1 mRNA及蛋白的表达水平。4.FCM法、蛋白质印迹法、细胞成球实验分别检测沉默GPx1基因表达后对A549微球体细胞的ROS水平、Sox2和Nanog蛋白表达水平以及A549微球体细胞成球能力的影响。应用流式细胞术和CCK-8法以及蛋白质印迹法检测转染GPx1-siRNA和其联合DDP(5 mg/ml)干预后,对细胞的生存率、凋亡水平、p-p38、p-ATF2、p53和Bax蛋白表达水平的影响。结果:1.培养获得悬浮的A549微球体细胞。CD133+CD44+细胞约占A549微球体细胞总数的(11.7±0.6)%。SOX2和Nanog蛋白在A549微球体细胞中的表达水平明显高于亲本A549细胞(p<0.05)2.DDP(5 mg/ml)处理48 h后对A549微球体细胞的生存率无显著影响(p>0.05)。A549微球体细胞中GSH含量、GPx1的活性和蛋白表达水平显著高于亲本A549细胞(p值均<0.05)3.ROS含量在A549微球体细胞中明显低于A549细胞(p<0.05)。转染GPx1-siRNA可显著下调GPx1 mRNA和蛋白的表达水平、以及抑制Sox2蛋白的表达水平和微球体的形成(p值均<0.05)。4.下调GPx1表达后并联合DDP处理后,A549微球体细胞的细胞存活率较对照组明显下调(P<0.05),而细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05)。此外,下调GPx1后以及联合DDP处理后,A549微球体细胞中p-p38、p-ATF2、p53和Bax表达较对照组显著上调(P<0.05)。结论:下调GPx1可能通过抑制A549微球体细胞中Sox2,上调ROS和激活p38-p53通路发挥抑制A549微球体细胞增殖、促进凋亡等作用,其可能成为肺癌治疗的潜在靶点。