论文部分内容阅读
辽宁新品系绒山羊是我国特有的遗传物种,其产品绒、肉、皮、毛都具有重要经济价值,因此,对辽宁新品系绒山羊相关基因生物学特性的研究具有重要的意义。褪黑激素是生物体内一种重要的信号物质,能够调控绒山羊绒毛的生长。然而,褪黑激素对辽宁新品系绒山羊相关基因的影响研究的较少。因此,本文首次以辽宁新品系绒山羊为研究对象,探讨褪黑激素对辽宁新品系绒山羊耳成纤维细胞中核心蛋白聚糖(DCN)、GMP还原酶2(GMPR2)和OCIAD2(卵巢癌免疫反应抗原抗体)三个新基因的表达影响。浓度分别为0.02g/L,0.2g/L,1g/L的褪黑激素分别作用于辽宁新品系绒山羊耳成纤维细胞,分别培养24h,48h,72h后对三个新基因进行荧光定量PCR检测。结果显示:(1)GMP还原酶2用褪黑激素处理48小时、72小时后较Actin相比,三个浓度的褪黑激素都能使其表达增加,但浓度为0.2g/L时效果最显著(P<0.5)。(2)核心蛋白聚糖用褪黑激素处理48小时、72小时后较Actin相比,三个浓度的褪黑激素都能使其表达增加,但浓度为1g/L时效果最显著(P<0.5)。(3)OCIAD2基因属于与癌症相关基因,表达量较Actin比较低,约为0,这一结果说明该基因在正常细胞中的表达量很低,褪黑激素对其表达影响不明显。运用生物信息学分析和RT-PCR方法对辽宁新品系绒山羊皮肤细胞中的UMP/CMP激酶新基因进行分析。结果显示:(1)信息学分析得知UMP/CMP激酶基因全长为1081bp,能够编码含有228个氨基酸的蛋白质,表现出较高的亮氨酸、甘氨酸、赖氨酸含量以及较低的组氨酸、色氨酸含量。该蛋白含有UMP/CMP激酶蛋白结构域。(2)RT-PCR检测结果显示,UMP/CMP激酶基因特异地表达于皮肤。角蛋白关联蛋白被认为能够影响绒山羊绒毛的生长,为了进一步研究这类基因的生理功能,本文以辽宁新品系绒山羊角蛋白关联蛋白KAP26.1为研究对象,制备多克隆抗体。结果显示将KAP26.1基因插入至PET-32a原核表达载体后在大肠杆菌中能够高表达,重组蛋白经纯化后作为抗原免疫家兔,制备兔抗KAP26.1多克隆抗体,用ELISA的方法检测经纯化得到的多克隆抗体具有高效价。Wescem blot结果证明所制备的抗体可以与角蛋白关联蛋白KAP26.1特异性结合。以上研究为进一步探索辽宁新品系绒山羊种质遗传特性奠定了一定的理论基础。对辽宁新品系绒山羊的生物学遗传特性的研究,使我们从分子水平加深了对我国特有遗传资源基础理论的研究,这为进一步保护遗传基因库,改良优良品种提供了理论依据。