论文部分内容阅读
目的 以从HCMV AD 169株扩增出pp65抗原克隆至真核载体而制备的pp65 DNA疫苗免疫小鼠，观察其诱导Balb／c小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答，以及细胞因子的变化，来证明该疫苗是否具高度免疫性和低毒副作用。对预防和治疗HCMV感染，特别是防治孕妇和育龄夫妇HCMV感染，预防神经残疾儿的出生具有重要意义。方法将24只健康Balb／c小鼠随机分成A、B及C三组，每组8只。A组(对照组)：0、2、4周分别于左后腿股四头肌注入生理盐水；B组(实验组 1)：0、2、4周分别于左后腿股四头肌注入200 ug pp65 DNA疫苗；C组(实验组 2)：0、2、4周分别于左后腿股四头肌注入200 ug pp65 DNA加佐剂CpG ODN 10 ug。免疫前3天小鼠接种部位注射0.5mg／ml盐酸布比卡因50 ul进行预处理，于免疫后第三周断尾采血，收集血清，末次免疫1周后摘眼球采血，其中0.1ml加EDTA抗凝，余收集血清，间接ELISA法检测各组小鼠血清中的pp65抗体效价；使用间接免疫荧光法，用流式细胞仪对CD3~+、CD4~+及CD8~+T淋巴细胞亚群进行测定；采用双抗体夹心ELISA法检测小鼠血清中的IFN-γ；采用放射免疫法检测小鼠血清中的IL-2。 结果 1．pp65 DNA疫苗及pp65 DNA疫苗+CPG ODN免疫Balb／c小鼠，第三周血清抗体效价分别为：A组为＜1:10，B组1:11.89，C组1:25.94；第七周血清抗体效价分别为：B组1:95.14，C组1:207.49。2．T细胞亚群CD4~+、CD8~+、CD3~+结果为：安徽医科大学硕士学位论文CD3+A组:54.94士4.06，B组:65.04士2.33，C组:74.16士2.08;CD4+A组:29.73士1.83，B组:42.72士1.14，C组:48.44士1.66;CDS+A组:18.82士1.09，B组:23.15士1.43，C组:26.44士1.37。各组间差别有统计学意义(P(0.01)。3.小鼠血清中的IFN--Y含量为:A组:98.5士9.86，B组:165.17士17.56，C组:245.50士26.29，各组间差别有统计学意义(P<0.01)。4.细胞因子IL一2检测结果为A组:5.52士0.73，B组:8.56士0.90，C组:14.09士1.50，各组间差别有统计学意义(P<0 .01)。结论1.H口脚基因疫苗能诱导Balb/c小鼠产生特异性的体液免疫和一定的细胞免疫应答。2.免疫佐剂CPG ODN能够加强人巨细胞病毒pp65DNA疫苗的免疫性。