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延胡索酸泰妙菌素是由一种担子菌侧耳属的高等真菌发酵得到截短侧耳素后,再经化学合成得到的氧化延胡索酸盐,对革兰氏阳性菌（如葡萄球菌、链球菌、猪肠球菌等）、革兰氏阴性菌（如克雷伯氏菌、志贺氏菌、埃希氏菌等）以及支原体（如猪肺炎支原体、鸡败血支原体）等都表现出较好的抗菌活性。由于其良好的抗菌效果,同时对动物的生长还有一定的促进作用,因此被用作兽药或饲料添加剂普遍应用于禽畜养殖中。体外研究表明,延胡索酸泰妙菌素对罗非鱼无乳链球菌的体外MIC为0.125-0.25 mg/L,是一种对罗非鱼无乳链球菌病具有较好开发前景的药物。然而,关于延胡索酸泰妙菌素在水生动物体内代谢的研究尚未见报道,因此本文拟研究延胡索酸泰妙菌素在尼罗罗非鱼体内药物代谢动力学和不同温度下的残留消除规律,以期为延胡索酸泰妙菌素能成为水产新药提供必要的药动学数据;同时,本文拟研究尼罗罗非鱼各组织中药物转运、代谢相关基因表达分布情况,以期从分子水平揭示水产动物体内药物代谢的规律,减少药物不良反应的发生,提高药物疗效。1.延胡索酸泰妙菌素在尼罗罗非鱼组织中的检测方法本实验采用高效液相色谱-串联质谱内标法,定量检测罗非鱼血浆及各组织（自然比例带皮肌肉、肝、肾、鳃）中延胡索酸泰妙菌素的含量。本实验中,以延胡索酸泰秒菌素-13C4作为内标标志物,样品采用乙腈溶液作为提取剂,用无水硫酸镁作干燥剂去除样品中的水份,正己烷溶液除脂,最后LC-MS/MS检测。结果表明,样品基线走动平稳,延胡索酸泰妙菌素和内标标志物峰形良好,无明显杂峰影响;内标标准曲线相关系数R2=0.9998,表示线性关系良好;组织平均回收率在96.33%-114.06%之间,表示回收率高;日内变异系数在1.26%-3.65%之间,日间变异系数在2.77%-5.28%之间,表示精密度良好;基质效应值在90.12%-95.06%范围内,表示基质效应不明显;各组织中的检测限（LOQ）为0.1μg/kg或μg/L,定量限（LOD）为0.5μg/kg或μg/L。以上条件满足试验要求。2.延胡索酸泰妙菌素在罗非鱼体内药物代谢动力学研究在25℃水温条件下,按20 mg/kg鱼体重的标准计算灌胃体积。单次口灌给药后,分别于停药后0.25 h、0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72h,96 h,120 h,144 h,168 h,采集血浆、自然比例带皮肌肉、肝、肾、鳃等组织。经LC-MS/MS检测各组织中延胡索酸泰妙菌素的浓度,绘制延胡索酸泰妙菌素在尼罗罗非鱼体内各组织中的药-时曲线,并采用Phoenix Winnonlin 8.1药代动力学软件计算血浆及各组织中的药代动力学参数。结果表明,在非房室模型法条件下,计算的延胡索酸泰妙菌素在尼罗罗非鱼体内药代动力学如下:在血浆、自然比例带皮肌肉、肝、肾、鳃组织中,延胡索酸泰妙菌素的药峰时间Tmax分别为0.5 h,1.0 h,0.5 h,0.5 h,0.5 h。达峰浓度值Cmax分别为5.23 mg/L、3.31 mg/kg、77.28 mg/kg、67.30 mg/kg、9.15 mg/kg。药-时曲线下面积AUClast分别为56.72 h·mg/L、27.35h·mg/L、404.75 h·mg/L、294.03 h·mg/L、111.36 h·mg/L。基于末端消除相的表观分布容积Vz＿F分别为12.12 L/kg、15.76 L/kg、1.71 L/kg、2.92 L/kg、4.33 L/kg。末端消除速率λz分别为0.03 1/h、0.05 1/h、0.03 1/h、0.02 1/h、0.04 1/h。末端消除半衰期T1/2分别为23.97 h、14.97 h、23.99 h、29.95 h、16.75 h。清除速率CL分别为0.35 L/h/kg、0.73 L/h/kg、0.05 L/h/kg、0.07 L/h/kg、0.18 L/h/kg。平均驻留时间MRTlast分别为19.68 h、13.03 h、10.22 h、14.06 h、15.33 h。研究结果表明延胡索酸泰妙菌素在罗非鱼体内吸收快速,分布广泛,达峰时间短,达峰浓度较高。3.不同水温下延胡索酸泰妙菌素在罗非鱼体内的残留消除规律研究分别在19℃,25℃和30℃水温条件下,以20 mg/kg/day鱼体质量对尼罗罗非鱼口灌延胡索酸泰妙菌素,连续灌胃5 d。于停药后1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、9 d、12 d、15 d、20 d、25 d、30 d采集血浆、自然比例带皮肌肉、肝、肾、鳃等组织。经LC-MS/MS检测,用Excel绘制延胡索酸泰妙菌素的药物消除曲线,计算消除曲线方程及消除半衰期(T1/2)等参数。根据消除后期测定的组织药物浓度及规定的最高残留限量（MRL=100μg/kg）,用WT 1.4休药期软件拟合出血浆及各组织中含药量降至要求水平（MRL）所需的休药期（WT）。结果表明,延胡索酸泰妙菌素广泛分布在罗非鱼各组织中,并且肝脏中药物残留浓度最高。在19℃,25℃和30℃水温条件下,T1/2在血浆中分别为2.76 d,2.13 d,1.64 d,自然比例带皮肌肉分别为2.71 d,1.85 d,1.31 d,肝为2.27 d,1.70 d,1.50 d,肾为2.84 d,2.32 d,1.94 d,鳃为3.16 d,2.42 d,1.74 d。在19℃时,各组织的休药期大小依次为:肾（11.88 d）>肝（10.41 d）>鳃（10.77 d）>血浆（8.83 d）>自然比例带皮肌肉（7.14 d）。在25℃时,各组织的休药期大小依次为:肾（8.40 d）>肝（8.21d）>鳃（8.07 d）>血浆（7.24d）>自然比例带皮肌肉（4.05 d）。在30℃时,各组织的休药期大小依次为:鳃（6.99d）>肾（6.51 d）>肝（6.29 d）>血浆（3.27 d）>自然比例带皮肌肉（2.92 d）。结果表明,延胡索酸泰妙菌素在罗非鱼体内的消除半衰期和休药期都随水温的升高而减少。因此,在实际养殖过程中,应适当地考虑不同水温条件下的休药时间,从而确定具体的食用安全期。建议水温为19°C、25°C和30°C时,休药期分别为12天、9天和7天。4.罗非鱼体内药物代谢相关基因的表达与分布本实验中采用相对定量法研究了CYP1A1、CYP1C1、CYP3A40、MDR1等与药物转运、代谢相关基因在罗非鱼肝、肾、鳃、肠、脑组织中的分布与表达情况。结果表明,CYP1A1、CYP1C1、CYP3A40、MDR1在尼罗罗非鱼的肝、肾、肠、鳃和脑组织中均有表达。CYP1A1在5个组织中表达水平由高到低依次为肠>肾>脑>肝>鳃,CYP1A1表达水平在肝、肾、肠、鳃组织中存在显著差异（P<0.05）,肾与脑之间无显著性差异（P>0.05）。CYP450 1C1在5个组织中表达水平由高到低依次为鳃>肝>肠>肾>脑,鳃、肾、肠和脑组织间存在显著差异（P<0.05）,鳃与肝之间无显著性差异（P>0.05）。CYP3A40在5个组织中表达水平由高到低依次为肝>肾>脑>肠>鳃,肝与肠、鳃、脑组织间存在显著差异（P<0.05）,肝与肾之间无显著性差异（P>0.05）。MDR1在5个组织中表达水平由高到低依次为肠>脑>肾>鳃>肝,肠与其他组织间存在显著差异（P<0.05）,肝与鳃之间肝与肾之间无显著性差异（P>0.05）。