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鱼藤酮(rotenone)是从豆科藤本植物鱼藤的根部提取的一种天然杀虫剂，是鱼藤根中的丰要有效杀虫成分，具有杀虫谱广、不污染环境和不易产牛耐药性等特点。鱼藤酮最初被作为杀虫剂使用，丰要抑制线粒体NADH脱氢酶即线粒体复合物Ⅰ(complexⅠ)，产牛的生化效应是抑制呼吸链对氧的的利用，当线粒体的复合物Ⅰ的功能降低时丰要产牛三种结果，即NADH不能氧化成NAD;质子传递障碍，ATP合成减少;脂质过氧化和自由基生成。研究发现PD病人的黑质-纹状体区神经元的complexⅠ活性明显降低，体外用鱼藤酮处理多巴胺神经元也证实了鱼藤酮对complexⅠ的抑制与多巴胺神经元死亡相关。因此鱼藤酮常作为PD的模型用药。 DJ-1最初被认为是原癌基因，同时发现其编码的蛋白与小鼠及其他哺乳动物的雄性牛殖功能有关，也有研究认为其作为RNA结合复合物的亚单位发挥起作用。DJ-1蛋白的缺失和无义突变都会导致家族性PD.其中DJ-1蛋白的点突变体L166P研究的最多，研究发现DJ-1蛋白在氧化应激后形成二聚体发挥功能，而其突变体L166P则不能形成二聚体，然而DJ-1在PD中的具体作用目前还不清楚。 研究表明Ca2+稳态失调在PD中起着重要作用。伊拉地平由于其脂溶性好，容易通过血脑屏障，首关消除作用强，口服后外周血中的伊拉地平基木上很快被代谢掉，而且其与神经元内的Ca2+离子通道亲和力相对较强，因此常做PD研究的首选药。 目前D J-1、伊拉地平在PD中多巴胺神经元死亡具体机制还不清楚。本研究拟从自噬、Ca2+稳态与PD关系的角度，研究DJ-1、伊拉地平及自噬与PD的关系。 丰要方法和结果: 1.pDsRed1-C1-DJ-1、L166P，pEGPF-N2-LC3质粒构建。以cDNA为模板，用PCR的方法获得DJ-1、LC3的目的片段，并分别转入pDsRed1-C1-DJ-1、pEGPF-N2质粒。利用点突变PCR方法获得pDsRed1-C1-L166P，测序证实。 2.鱼藤酮处理后DJ-1在SH-SY5Y细胞内定位。转染带红色融合蛋白的DJ-1及L166P蛋白，分别予空白处理和鱼藤酮处理，观察细胞内DJ-1定位变化，结果显示鱼藤酮处理后，线粒体内DJ-1蛋白增多，而鱼藤酮处理后L166P则后则无明显改变，且L166P突变体由于不能形成二聚体，其荧光也很弱。 3.SH-SY5Y细胞自噬。电镜结果示DJ-1转染组细胞鱼藤酮处理后自噬泡形成相对对照组增多，而下调组和L166P突变组细胞自噬泡情况相对对照组增多。 4.伊拉地平对鱼藤酮诱导的细胞损伤的作用。用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法、MMP、免疫荧光法、透射电镜、荧光蛋白标记法测定伊拉地平对鱼藤酮诱导的细胞自噬的保护作用，结果显示伊拉地平能减弱有鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞自噬。