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目的：1.阐明白介素-35(interleukin-35, IL-35)作为免疫调节因子,对T淋巴细胞增殖效应的可能影响。2.探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)在IL-35影响细胞增殖效应中的作用。3.明确mTORC2在IL-35影响细胞增殖中的确切意义及作用机制,为探索脓毒症免疫调控途径提供新线索。方法：以Jurkat细胞作为人T淋巴细胞模型。10% FBS-RPMI 1640完全培养基重悬细胞,调整细胞浓度至1×105/ml,取1 ml/孔接种于12孔培养板,采用不同浓度IL-35 (10,50,250ng/ml)于不同时间点(12、24、48 h)予以刺激,刺激前6h予以PMA(50 ng/ml)和Ionomycin(1μM)辅助活化。实验一：采用1L-35刺激后,CCK法检测细胞增殖活性,分析时间/剂量效应关系；流式细胞术检测细胞周期分布,明确IL-35抑制T淋巴细胞增殖反应的方式。实验二：采用Western blot (WB)法及荧光共聚焦法检测随IL-35刺激剂量的增加,mTORC2核心组分mTOR. Rictor蛋白表达及其下游信号通路蛋白SGK1、p27变化情况,籍以分析mTORC2在IL-35介导T淋巴细胞增殖抑制中的作用。实验三：应用慢病毒转染的方法对mTORC2关键组分Rictor进行调节,构建细胞模型,进而再次应用CCK法对IL-35影响下的细胞增殖情况以及应用WB法对mTOR、SGK1、p27蛋白表达情况进行检测,籍以分析mTORC2及其下游信号蛋白SGK1、p27在IL-35介导T淋巴细胞增殖抑制中的关键作用与调控环节。结果：1.当IL-35剂量达到50 ng/ml知250 ng/ml、刺激12 h后,与对照组比较即呈现明显的增殖抑制现象(P<0.05)；而10 ng/ml组在刺激时间达24 h和48 h时,Jurkat细胞增殖活性也显著下降(P<0.05)。流式细胞术结果显示,在IL-35作用下,与对照组相比,更多的细胞停留在GO/G1期(50 ng/ml及250 ng/ml组,P<0.05)。2.WB结果显示,单独P/I活化的T淋巴细胞会引起mTOR、Rictor、 SGK1、p27的磷酸化水平增力(P-mTOR Ser2481, P-Rictor Thr1135, P-SGK1 Ser422, P-p27 T157; P<0.05); IL-35作用下,随剂量的增加,与活化对照组相比,各组蛋白磷酸化水平呈下降趋势(P<0.05),而各组非磷酸化蛋白水平无明显差异(P>0.05)；共聚焦显微镜结果验证了上述变化趋势。3.设计Rictor Thr1135突变慢病毒,构建细胞模型并采用WB验证Rictor表达良好后,检测IL-35作用下模型细胞的增殖及蛋白表达情况。结果显示,干扰Rictor磷酸化位点以后,IL-35介导T淋巴细胞增殖抑制效应显著下降；同时mTORC2核心组分蛋白mTOR及其下游信号通路蛋白SGK1, p27其磷酸化水平与对照组无明显差异。结论：1.IL-35能够以时间/剂量依赖特性对T淋巴细胞增殖产生抑制作用,其效应的发挥与干扰细胞周期分布有关。2.以mTOR和Rictor为核心组分的mTORC2在IL-35介导T淋巴细胞增殖抑制过程中起到关键作用。3.mTORC2-SGK1-p27可能是IL-35调控T淋巴细胞增殖抑制效应的重要信号通路；通过对Rictor蛋白磷酸化位点的调节有助于干扰IL-35介导的增殖抑制效应。