研究背景与目的:　　类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以关节滑膜炎症为主要表现的自身免疫性疾病。文献记载，乌头汤用于痹证的治疗疗效确切。乌头汤记载在《金匮要略》，是东汉时代著名医学家张仲景创制的一首名方，由川乌、麻黄、芍药、黄芪、炙甘草五味药材组成，具有温经祛寒，除湿止痛的功效，主治寒湿痹证。著名老中医李可先生在原方基础上加上黑豆及防风，创改良方，以达到制约制川乌毒性的目的，同时保持原方的药效。　　本研究是在课题组前期已开展的配伍减毒实验、谱效学研究和乌头汤生物碱对人类风湿关节炎滑膜细胞(RA-HFLS)增殖影响研究的基础上，进一步对乌头汤的配伍减毒、以及乌头汤生物碱抑制人类风湿关节炎滑膜细胞(HFLS)增殖的机制进行探究，为乌头汤的临床用药以及进一步的开发提供科学依据。　　方法:　　1、乌头汤配伍减毒研究　　采用HPLS-ESI-MS技术分析生川乌单煎液、制川乌单煎液、金匮乌头汤、李可改良之乌头汤中乌头碱型生物碱类成分，比较炮制以及配伍对乌头碱型生物碱成分的影响，同时，利用UPLC-MS/MS技术测定生川乌单煎液、制川乌单煎液、金匮乌头汤、李可改良之乌头汤中6种乌头碱的含量，总结川乌减毒的规律。　　2、乌头汤中麻黄总生物碱对TNF-α诱导RA-HFLS PI3K/Akt信号通路的调节作用　　利用体外培养HFLS，TNF-α诱导HFLS增殖模拟RA体内环境，采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)，比较乌头汤不同生物碱部位对HFLS的增殖抑制作用。设计3个给药组进行实验:乌头汤总生物碱组、制川乌总生物碱组、麻黄总生物碱组，并对各组细胞增殖抑制率进行统计分析。　　分析结果显示，麻黄总生物碱对RA-HFLS增殖抑制作用效果最佳，因此，以麻黄总生物碱为研究对象，进一步探究麻黄总生物碱抑制RA-HFLS增殖的作用机制。通过ELISA法测定TNF-α诱导的RA-HFLS细胞培养上清发现，观察麻黄总生物碱对RA-HFLS中TNF-α、IL-1β表达的影响。同时利用Western Blot方法检测不同浓度麻黄总生物碱对TNF-α诱导的RA-HFLS中非磷酸化及磷酸化的Akt和NF-κB蛋白表达的影响。　　结果：　　在乌头汤配伍减毒研究部分，对比生川乌单煎液和制川乌单煎液中乌头碱型生物碱成分以及6种乌头碱的含量发现，药材中所含的毒性较强双酯型乌头碱经炮制后，水解成毒性较弱的单酯型乌头碱，从而达到减毒的炮制效果;通过与制川乌单煎液对比，发现金匮乌头汤和李可改良之乌头汤配伍后，已基本上不存在双酯型乌头碱水解减毒的作用，主要是单酯型乌头碱的成分损失起到减毒的作用，而且李可改良之乌头汤的配伍减毒效果要优于金匮乌头汤。　　在乌头汤中麻黄总生物碱对TNF-α诱导RA-HFLS PI3K/Akt信号通路的调节作用研究部分，体外细胞药效筛选研究表明麻黄总生物碱对RA-HFLS增殖的抑制作用强于乌头汤总生物碱和制川乌总生物碱。ELISA检测结果显示麻黄总生物碱能降低RA-HFLS中TNF-α、IL-1β表达水平，并呈剂量依赖性。Western Blot方法分析显示不同剂量的麻黄总生物碱均能下调RA-HFLS磷酸化的Akt和NF-κB蛋白表达，并呈剂量依赖性，但对RA-HFLS中非磷酸化的Akt和NF-κB蛋白表达则无抑制作用。　　结论：　　乌头汤在炮制过程中双酯型乌头碱水解成单酯型乌头碱的基础上，通过配伍来进一步减少单酯型乌头生物碱的成分，从而起到减毒的效果，同时在配伍过程中双酯型乌头碱水解减毒发挥的作用非常微弱。　　0.25mg/ml～1.00mg/ml的麻黄总生物碱可以降低RA-HFLS中TNF-α、IL-1β表达水平，同时也降低Akt磷酸化水平，下调磷酸化NF-κB蛋白表达，抑制RAFLS增殖，发挥促凋亡及抗炎作用。