【摘 要】
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目的:探讨益肾健脑方改善血管性痴呆大鼠氧化应激损伤的作用及对大鼠海马组织Nrf2(胞核)、GPX4表达的影响。方法:从相关因子Nrf2、GPX4蛋白的表达与氧化应激的关系为研究点切入,选用SPF级SD雄性大鼠65只,适应性饲养3天后,按照随机对照原则,选择6只为假手术组,其余59只采用改良2-VO法建立血管性痴呆的动物模型,造模后4周行Morris水迷宫实验进行筛选,取造模成功大鼠随机分为模型组、
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目的:探讨益肾健脑方改善血管性痴呆大鼠氧化应激损伤的作用及对大鼠海马组织Nrf2(胞核)、GPX4表达的影响。方法:从相关因子Nrf2、GPX4蛋白的表达与氧化应激的关系为研究点切入,选用SPF级SD雄性大鼠65只,适应性饲养3天后,按照随机对照原则,选择6只为假手术组,其余59只采用改良2-VO法建立血管性痴呆的动物模型,造模后4周行Morris水迷宫实验进行筛选,取造模成功大鼠随机分为模型组、阳性对照组、中药组。阳性对照组、中药组按规定剂量灌胃给药,假手术组、模型组给予等量蒸馏水,灌胃4周后行Morris水迷宫实验比较各组大鼠行为学变化,处死大鼠取脑,分离左侧大脑皮质及海马,通过苏木素伊红(HE)染色检测血管性痴呆大鼠海马CA1区组织病理形态;分离右侧大脑海马组织,通过蛋白印迹法(Western blot)检测Nrf2(胞核)、GPX4蛋白表达情况。实验数据采用SPSS23.0统计软件及Graphpad prism 7.0作图软件进行处理。计量资料以均数±标准差((?)±s)表示,各组样本符合正态分布及方差齐性,采用单因素方差分析进行组间比较,并用LSD法进行多重比较,方差不齐者则采用塔姆黑泥法进行两两比较,以P<0.05或P<0.01判定为差异具有统计学意义。结果:1.Morris水迷宫检测:定位航行试验中,随着训练时间延长,各组大鼠逃避潜伏期都有不同程度的缩短。试验前2天,各组大鼠EL无明显差异(P>0.05),第3天,与假手术组比较,模型组大鼠的平均EL明显延长(P<0.01),与模型组相比,中药组及阳性对照组大鼠EL虽有缩短趋势,但无统计学意义(P>0.05);第4、5天,与模型大鼠比较,各组大鼠平均EL均明显缩短(P<0.01)。在空间探索试验中,与假手术组比较,模型组大鼠经过原始平台次数、目标象限停留时间均减少(P<0.05);与模型组比较,中药组及阳性对照组大鼠经过原始平台次数、目标象限停留时间明显增加(P<0.05)。2.HE染色:光镜下观察大鼠海马CA1区的病理形态变化。假手术组细胞层次分明,未见明显损伤,细胞结构完整,细胞核大而圆,染色均一;模型组大鼠海马CA1区细胞排列无序,结构破坏,细胞水肿,空泡形成,细胞皱缩,细胞核固缩,染色质边集,着色变深,染色不均一;与模型组大鼠相比,阳性对照组大鼠海马CA1区细胞层数增加,排列较为紧密,病理形态均有不同程度改善,神经元轮廓清晰,核圆易辨认,染色较均一;中药组神经元细胞变性较模型组减少,排列相对整齐,细胞水肿、空泡及核固缩明显减少。3.海马组织Nrf2(胞核)、GPX4蛋白表达:Western blot结果显示,与假手术组相比,模型组Nrf2(胞核),GPX4的蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,阳性对照组Nrf2(胞核),GPX4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,中药组Nrf2(胞核),GPX4的蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:1.改良永久性双侧颈总动脉结扎法制备VD大鼠模型可以较好的复制VD大鼠行为学及病理学的改变,是目前公认的VD造模方法,模型可靠。2.益肾健脑方及西药多奈哌齐均可改善VD大鼠学习记忆能力,改善神经细胞病理损害,上调Nrf2细胞核内表达,并激活下游GPX4蛋白表达。3.益肾健脑方可能是通过Nrf2/GPX4通路改善VD大鼠脑组织的氧化应激损伤。
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