百草枯(PQ)以其良好的除草效果得到人们的青睐，但随之带来的误服或自杀性口服的极高死亡率给医疗工作者提出了巨大的挑战。人们尝试用各种方法抢救百草枯中毒，但至今仍不理想。临床上常用的治疗措施之一是血液灌流(HP)，HP可以清除血浆中的百草枯，防治中毒急性期的多器官功能衰竭和后期的肺纤维化及呼吸衰竭。中毒严重者常需多次灌流，但目前临床缺少检测灌流前后百草枯浓度的方法，仅凭经验决定灌流次数。本课题建立了血液灌流前后血液中百草枯浓度的检测方法，同时对影响百草枯中毒预后的因素进行了分析，为临床监测及救治百草枯中毒提供标准和依据。 第一部分紫外分光光度法测定血液灌流前后百草枯浓度 目的：建立紫外分光光度法测定血液灌流前后百草枯浓度的方法，为临床有效抢救百草枯中毒提供量化指标。 方法：(1)样品预处理血清样品与20％三氯乙酸按照6∶1混匀，以4000r/min离心 10min，取上清液进行紫外测定。(2)检测波长的选择配制50μg/ml的百草枯溶液，以蒸馏水为空白对照，进行紫外扫描，百草枯在257nm处有最大吸收，干扰最小，选定257nm为检测波长。(3)标准曲线绘制配制500μg/ml的百草枯溶液，将其用空白血清逐级稀释为 50、10、4、2、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05μg/ml 的百草枯溶液，按照方法(1)处理。在257nm下测定吸收度A值，以A值对浓度C进行回归，得标准曲线方程。(4)回收率试验：采用加入回收法，按方法(1)处理血清，用血清上清液配制浓度为 2.00、4.00、10.00、50.00μg/ml 的百草枯溶液。以同样处理的血清上清液作参比，紫外测定，计算平均回收率。(5)精密度试验：配制0.4、0.8、2.0、4.0μg/ml的百草枯溶液，分别在日内各作5次，4℃冰箱保存，并隔日对每个浓度样品连续各做5次，分别求算日内与目间相对标准偏差。(6)样品含量测定：血清中加入20％三氯乙酸(6∶1)，涡旋混匀1min，以4000r/min离心5min，取上清液上机分析。(7)SOD测定：按照SOD测试盒说明分别测定百草枯中毒患者血清中的SOD活力。 结论：本实验建立的紫外分光光度法测定灌流前后百草枯血药浓度，线性范围宽、灵敏度高、重现性好；同时建立的血样处理方法可靠，为临床血液灌流前后百草枯浓度的测定提供了简单快速的检测方法。但检测限不能满足痕量残留的检测。 第二部分利用胶束毛细管电泳在线推扫富集技术检测人体血液灌流前后百草枯残留 目的：建立采用胶束毛细管电泳在线推扫富集技术快捷检测血液中百草枯浓度痕量残留的方法，为临床多次血液灌流治疗百草枯中毒提供依据。 方法：(1)电泳条件与操作：未涂层熔硅毛细管，48.5cm×50μm (有效柱长40cm)；运行缓冲液：50mmol/l磷酸盐-80mmol/LSDS (pH=2.5)；进样时间 600s；进样压力50nabar；运行电压 22kV；紫外检测波长 260nm。实验前，毛细管柱分别用 1.0mol/l NaOH溶液、1.0mol/l HCl溶液、水、背景缓冲溶液(BGS)冲洗 10min，用缓冲溶液平衡 10min。每次进样前分别用 1.0mol/l NaOH溶液、1.0mol/l HCl溶液、水和BGS各冲洗 5min。(2)样品预处理：血消中加入10％三氯乙酸(3∶1) 静置10min，以10000r/min离心5min，取上清液上机分析。(3)线性范围和检出限：准确称取百草枯标样适最，配成标准溶液系列(35，20，10，5，1，0.4，0.2，0.1，0.05mg/l)。在已建立电泳条件下进行检测，以峰高对其质量浓度(x，mg/l)作图，得标准曲线方程。(4)回收率及相对标准偏差：取中毒病人血浆分成6份，其中3份直接按实验方法处理，取其分析结果平均值作为基样浓度，另3份准确加入适量百草枯标准品，按实验方法处理，测定结果作为加标浓度，计算RSD和回收率。(5)样品含量测定：对河北大学附属医院提供百草枯中毒患者血样按以上方法(2)处理，进行检测分析。 结论：本实验建立的利用胶束毛细管电泳在线富集技术检测血液中百草枯浓度痕量残留的方法，线性范围宽、检测限低，灵敏度高、重现性好；样品预处理方法简单、成本低、不会造成环境污染，适合于临床血液中百草枯浓度痕量残留的检测。 第三部分影响百草枯中毒预后的因素分析 百草枯中毒患者预后受多种因素影响，目前尚无特效治疗方法。本实验对河北大学附属医院救治的百草枯中毒患者的预后进行回顾性分析，为临床治疗提供依据。 实验结果表明百草枯中毒患者的预后与诸多因素有关，现归纳如下： 1.服毒剂量与就诊时间本研究资料显示服毒量越大，中毒症状越重，病死率越高。对口服中毒而言，就诊越早，洗胃越早越彻底，毒物吸收越少(中毒剂量也越小)，预后就越好。 2.首次灌流时间血液灌流的早晚与患者的存活与否有很大关系。灌流越早，病死率越低。 3.并发症百草枯可以在多种器官及组织内蓄积，引起相应的损伤，甚至引起多器官功能衰竭。本组病例肺、肾、肝、心及消化道的并发症均有发生，以肺、肾为主。死亡组各种并发症发生频率均高于存活组，且受累器官数也较多，提示并发症发生与否，以及受累器官的数目影响病人的预后。 4.SOD活力大部分病人在灌流后SOD活力增高，这是因为随百草枯浓度的降低，生成的氧自由基减少，清除自由基的SOD活力也应随之升高。