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目的:
通过观察养阴清热理气方(A)及各拆方,当归、女贞子(Y);天花粉、蚤休(Q);旋复花、八月札(Q)对人食管癌细胞移植瘤裸鼠心肝脾肺肾及消化系统胃、肠组织的病理组织学变化和受损生命脏器心肝脾肺及胃关键分子PKCα、PLC-γ1蛋白表达的影响,探讨养阴清热理气方及其拆方对人食管癌移植瘤裸鼠模型生命脏器的影响,阐明养阴、清热、理气治法在食管癌发生、发展过程中的作用,并以方测证,反推阴虚、热毒、气滞与食管癌发病之间的关系。
方法:
采用皮下种植EC9706细胞造模的荷瘤裸鼠为实验对象,设空白组(K)、模型组(M)、养阴组(Y)、清热组(Q)、理气组(L),全方组(A)(养阴清热理气方)共六组。观察荷瘤裸鼠一般行为表现,记录裸鼠饮水饮食量及体重变化,测量肿瘤大小,计算肿瘤体积倍增时间;以上处理85天后处死裸鼠,剥离肿瘤,称重,计算抑瘤率;分别取出裸鼠生命脏器心肝脾肺肾及消化系统的胃、肠组织,HE染色,光学显微镜下观察其病理组织学改变;免疫组化法测量受损脏器心肝脾肺及胃组织关键分子PKCα、PLC-γ1蛋白表达;应用SPSS13.0软件,进行重复测量方差分析、单因素方差分析、Spearman相关分析和曲线拟合(α=0.05)。
结果:
①养阴清热理气方及各拆方能够影响人食管癌细胞移植瘤裸鼠一般情况,表现为:能改善荷瘤裸鼠饮食饮水量及体重,抑制肿瘤生长,以全方组抑瘤率最佳,余依次为养阴组、清热组,理气组。②人食管癌细胞移植瘤裸鼠重要生命脏器发生明显病理组织学改变:心肌纤维可见细胞脂肪变性异常病理改变;肝脏少部分肝细胞有轻度变性、肝细胞索紊乱肝窦变窄;脾小结明显缩小,淋巴细胞明显减少而稀疏;肺组织中细支气管及间质,肺泡间隔均明显的充血和炎细胞渗出等病理改变:胃黏膜上皮细胞的萎缩。③养阴清热理气方及各拆方对裸鼠生命脏器损伤有不同影响,全方效果最好。④免疫组化法在各生命脏器心肝肺脾及胃内可检测到关键分子PKCα、PLC-γ1蛋白表达,其中肝细胞、肺组织细胞模型组PKCα表达均明显减弱,用药后其表达增强;
脾组织模型组PKCa表达过度,用药后其表达下调;胃粘膜上皮细胞模型组PLC-γ1表达降低,用药组均有不同程度增强,以全方组最高。
结论:
①养阴清热理气方及各拆方均能明显改善人食管癌细胞移植瘤裸鼠饮水饮食量,体重等一般情况;能明显抑制移植瘤增生,以全方效果最好,三方联用具有协同作用。②人食管癌细胞移植瘤裸鼠生命脏器发生明显病理组织学改变。③养阴清热理气方及各拆方均明显改善人食管癌细胞移植瘤裸鼠生命脏器病理组织学改变。④人食管癌细胞移植瘤裸鼠生命脏器病理损伤的改变与关键分子PKC α、PLC-γ1蛋白表达相关。⑤在食管癌病变中,阴虚,热毒,气郁症候病机的发生与肿瘤引起的生命脏器病理损伤相关,与生命脏器PKC α、PLC-γ1表达有密切关联。⑥清热养阴理气方是治疗食管癌引起的生命脏器受损的有效治疗方剂。