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目的：在体外探讨万古霉素单用及分别与利福平,左氧氟沙星,磷霉素联用时万古霉素对耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的防突变浓度(MPC)水平,为优化抗菌治疗提供理论依据。方法：1.随机挑选安徽省细菌耐药监测中心2010年收集的初筛表皮葡萄球菌15株,经聚合酶链反应扩增甲氧西林耐药基因mecA、葡萄球菌属保守序列16srRNA、表皮葡萄球菌种特异序列进行MRSE验证。2.对验证后的MRSE,按照琼脂平板倍比稀释法测定其MIC。3.对敏感菌进行联合药敏试验后分别计算其部分抑菌浓度指数以了解万古霉素与上述各药联用的相互作用性质。4.应用肉汤法富集浓度为1010CFU/mL细菌,琼脂平板倍比稀释法测定上述各药单用及分别与万古霉素联用对敏感MRSE菌株的MPC。与万古霉素联用的左氧氟沙星(2mg/L)或利福平(2和4mg/L)浓度为健康成年人及成年肺结核患者常规用药达到稳态时的平均血药浓度,对应治疗方案是左氧氟沙星：500mg,口服或静滴,每天一次；或利福平：450mg或600mg,口服或静滴,每天一次。与万古霉素联用的磷霉素浓度是32mg/L,为磷霉素对葡萄球菌的敏感折点浓度。上述各药联用浓度均远低于各自对MRSE的MPC。5.对在最高单药浓度平板上生长的菌株在无药琼脂平板上传代2次后测定其MIC,若其MIC低于耐药折点,则重新接种1010CFU于更高的浓度平板即50%×,60%×,70%×,80%×,90%×,100%×MPC,以了解能否筛选出更高MIC的突变体。结果：1.共找到10株确证的MRSE。2.万古霉素、利福平、左氧氟沙星、磷霉素单药对上述10株MRSE的敏感率为100%,100%,50%和90%。3.上述各药与万古霉素联用时的FICI分别是1.5<=FICI万古霉素+利福平<=2.0,1.5<=FICI万古霉素+左氧氟沙星<=2.0,0.5<FICI万古霉素+磷霉素<=1.5。4.万古霉素、利福平、左氧氟沙星、磷霉素单药对敏感MRSE的MPC为16-32mg/L,>64mg/L,4-16mg/L,及>=64mg/L。5.万古霉素、利福平、左氧氟沙星、磷霉素单药筛选的一步突变体的MIC分别是2或4mg/L,>64mg/L,4或8mg/L,及>=64mg/L。6.与利福平或左氧氟沙星联用时万古霉素对MRSE的MPC为16-32mg/L,与磷霉素联用时万古霉素对MRSE的MPC降为1-4mg/L；结论：一步突变即可产生左氧氟沙星、利福平、磷霉素耐药的MRSE,但产生不了万古霉素不敏感株。与磷霉素联用可以显著降低万古霉素对MRSE的MPC。目的体外探讨总接种量固定前提下不同细菌密度对万古霉素对耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的防突变浓度(MPC)的影响。方法1.选择安徽省细菌耐药监测中心2010年收集的MRSE菌株10株,均已经聚合酶链反应扩增甲氧西林耐药基因mecA、葡萄球菌属保守序列16srRNA、表皮葡萄球菌种特异序列证实。2.按照琼脂平板倍比稀释法测定万古霉素对上述10株MRSE的MIC。3.应用肉汤法富集浓度为1010CFU/mL细菌,将1.2×1010CFU的细菌稀释于含有倍比稀释万古霉素浓度且终体积分别为200和30m1的M-H肉汤,这样细菌密度分别为6×107CFU/ml和4×108CFU/ml.以37℃孵化36h无细菌生长的最低药物浓度作为MPC。4.将孵化36h后在1/2MPC浓度上生长的细菌菌液稀释后传代2次后测定其MIC,若其MIC低于MPC,则以1/2MPC浓度为基础线性递增20%至MPC浓度以了解能否筛选出更高MIC的突变体。结果1.万古霉素对上述10株MRSE的MIC为0.5或1mg/L。2.当细菌密度为6×107CFU/ml时万古霉素对上述10株MRSE的MPC为2或4mg/L,当细菌密度为4×108CFU/ml时万古霉素对上述10株MRSE的MPC为8或16mg/L。3.当细菌密度为6×107CFU/mL时,1/2MPC浓度上筛选的一步突变体的MIC等于其对应野生株的MPC值(=2或4mg/L)；当细菌密度为4.0×108CFU/mL时,1/2MPC浓度上筛选的一步突变体的MIC等于其对应野生株的MIC值,但万古霉素对在60%×、70%×、80%×或90%×MPC系列最高万古霉素浓度中生长细菌的MIC等于2或4mg/L；对于同一株野生菌,万古霉素对其在细菌密度为6×107CFU/mL和4.0×108CFU/mL时筛选的一步最不敏感突变体的MIC相同。与野生株相比,一步突变体的MIC多有4倍以上(包括4倍)升高(2株菌例外)。结论1.万古霉素对MRSE的MPC随细菌密度增加而升高,MPC应看作一步最不敏感突变体的实际MIC而非理论上的传统MIC值；2.对于1010CFU的接种量,万古霉素对不同细菌密度筛选出来的一步最不敏感突变体的MIC相同；3.细菌菌量是决定能否产生突变体的前提条件,但细菌密度决定了突变选择窗的位置；4.一步突变产生不了万古霉素不敏感株；