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邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)是邻苯二甲酸类(PAEs)中的一种,是一种较常见的塑化剂。DBP对于多种树脂具有很好的溶解能力,常用于聚氯乙烯加工、硝酸纤维素涂料等,对制品有良好的软化作用和优良的稳定性,因此常作为增塑剂被广泛使用。但是由于在加工过程中,DBP并没有与高分子碳链聚合,随着时间的推移,会逐渐地从中释放出来,进入环境和生物体造成潜在的危害,被认为是一种环境内分泌干扰物,也被称作环境激素。当前,美国、欧盟、中国等均已对塑料等产品中塑化剂的使用做了禁止或限用的规定。但受各种因素影响,当前非法使用或滥用邻苯二甲酸酯类物质的现象依然普遍存在,加强食品中塑化剂类残留的检测是防控该类污染物的重要环节。酶联免疫吸附分析法当前已广泛应用于药物残留检测,该方法除具有灵敏、快速、简便的优点外,还具有可同时检测多个样品、特异性强等特点。本研究采用单克隆抗体技术和酶联免疫测定等技术,合成DBP的人工抗原,筛选DBP单克隆抗体,建立了检测DBP残留的ELISA检测方法。1.以4-硝基邻苯二甲酸为原料,经过酯化、还原,采用重氮化法与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)等载体蛋白偶联合成邻苯二甲酸二丁酯人工抗原,通过紫外扫描初步判定两种完全抗原DBAP-BSA和DBAP-OVA偶联成功。2.选择6-8周龄的BALB/c雌性小鼠进行免疫,研究了免疫方式、免疫剂量、载体蛋白及免疫次数对免疫效价的影响。结果显示,背部皮下逐步加强免疫比多次同剂量免疫效果较好；首次免疫100μg/只比50μg/只免疫效果要好。3.通过实验对比,将DBAP-BSA作为免疫原,DBAP-OVA作为包被原。五免后阳性血清效价达到1：12000,通过杂交瘤技术筛选出3株能稳定分泌抗DBP特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。选取其中一株细胞2B3,制备抗DBP腹水,效价达1：16000,蛋白浓度为22.4mg/mL。4.利用细胞株2B3的制备的单抗建立了检测DBP残留的CiELISA方法。采用包被原最佳稀释度1：4000,抗体最佳工作浓度1：16000,在优化条件下,得到DBP对包被原和抗体结合反应的CiELISA标准抑制曲线,方程Y=-0.1574x+0.6603(R=0.9889)。IC50=5.73ng/mL,交叉实验表明,该单抗与PAEs类其它物质交叉反应较低,或无交叉反应。5.将建立的间接竞争ELISA初步应用于牛奶的添加回收实验,样品净处理后用于测定。当牛奶样品作3倍稀释时,样品基质干扰可忽略,且0-50ng/mL范围内,标准曲线为：Y=-0.3015x+0.6461(R2=0.9867)。用0.5、1.5、2.5ng/mL共3个浓度的DBP标准液做添加回收实验,经检测,药品回收率在76.41%-82.06%,批内差异在5.14%-8.25%之间,批间差异在4.04%-7.33%之间。