论文部分内容阅读
目的原发性干燥综合征(primary Sjogren’s syndrome,pSS)是一种主要累及外分泌腺体的慢性炎症性自身免疫性疾病,发病机制仍不明确。研究表明,Th17细胞是pSS发病的关键因素之一,且Th17/Treg细胞平衡向促炎性Th17细胞轴的转变加剧了pSS。IL-17A主要由Th17细胞产生,pSS患者的IL-17A细胞因子水平增加,与疾病活动和严重程度相关。V-组跨膜结构域包含物1(V-set and transmembrane domain containing 1,VSTM1)是免疫基因组学分析鉴定的新的可溶性细胞因子及潜在的白细胞分化抗原基因。VSTM1-v2可以促进Th17细胞的分化及IL-17A的分泌,因此我们推测VSTM1-v2可能在pSS发病过程中发挥作用。本研究旨在研究VSTM1-v2与IL-17A表达的相关性、与pSS疾病活动度相关血清学指标的相关性,探讨其作为pSS的生物学标志物的可能性,为深入研究pSS的发病机制提供新思路。方法1.选取符合纳入标准的79名pSS患者以及50名年龄和性别匹配的健康对照。2.通过标准Ficoll密度梯度离心获得PBMCs,用Trizol法提取PBMCs中的总RNA,经1%琼脂凝胶电泳及分光光度计法检测评估总RNA质量。3.将RNA逆转录为cDNA,PCR反应扩增(预变性、变性、退火、延伸、终末延伸),扩增产物进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测,通过扩增曲线和溶解曲线分析识别特异性扩增产物。采用2-ΔΔCt分析PBMCs中VSTM1-v2和IL-17A的mRNA的表达水平。4.通过欧洲抗风湿病联盟(the European League Against Rheumatism,EULAR)提出的ESSDAI评估及常规方法测量pSS患者的疾病活动参数,用间接免疫荧光法测血清中的ANA,免疫印迹法测血清中的抗SSB、抗SSA、抗RO52,手工法测血沉,BNⅡ全自动蛋白分析仪-散射比浊法测血清中的CRP、IgG等特定蛋白。5.通过统计分析软件GraphPad Prism 5.01分析VSTM1-v2 mRNA和IL-17A mRNA表达水平在pSS患者和健康对照之间的差异,分析pSS患者中VSTM1-v2 mRNA的表达水平与IL-17A mRNA的表达水平、ESSDAI、ESR、CRP、IgG、ANA、抗SSB、抗SSA及抗RO52之间的相关性。P<0.05被认为具有统计学意义。结果1.与健康对照相比,pSS患者的PBMCs中VSTM1-v2 mRNA的表达水平(P=0.0040)显著增加。2.与健康对照相比,pSS患者的PBMCs中IL-17A mRNA的表达水平(P=0.0412)增加。3.pSS患者中的VSTM1-v2 mRNA表达水平与IL-17A mRNA表达水平(r=0.2781,P=0.0131)呈正相关。4.pSS患者中的VSTM1-v2 mRNA表达水平与ESSDAI(r=0.3662,P=0.0009)、ESR(r=0.2606,P=0.0204)、CRP(r=0.3233,P=0.0037)和IgG(r=0.2880,P=0.0129)呈正相关。5.pSS患者中的VSTM1-v2 mRNA表达水平与ANA(r=0.0167,P=0.8832)、抗SSB(r=﹣0.0345,P=0.7626)、抗SSA((r=﹣0.0615,P=0.5900)和抗RO52((r=﹣0.0237,P=0.8356)之间无相关性。结论VSTM1-v2与IL-17A在pSS患者PBMCs中表达增加,VSTM1-v2的表达与pSS疾病活动相关,VSTM1-v2可能通过促进IL-17 A的分泌参与pSS的发病过程,可能是pSS发病过程中的一个新的细胞因子。