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肠球菌属于乳酸菌,是人和动物肠道及部分食品中的重要微生物菌群,能产生抗菌肽细菌素(Bacteriocin)-肠球菌素(Enterocin)。肠球菌素不仅可抑制与其相关的群菌还对革兰氏阳性致病菌及食源性病菌有抑制作用,因此有望应用在动物饲料添加剂和天然食品保鲜剂中。本研究旨从分离自酸马奶且具有抑菌特性的肠球菌BZ2的细菌素基因进行原核表达,以提高所产细菌素的量,为进一步研究抑菌特性研究,及新型微生态制剂的开发使用提供理论依据。本研究旨从分离自本实验室分离保存的具抑菌特性的肠球菌中,进一步筛选肠球菌属于乳酸菌,是人和动物肠道及部分食品中的重要微生物菌群,能产生抗菌肽细菌素(Bacteriocin)—肠球菌素(Enterocin)。肠球菌素不仅可抑制与其相关的群菌还对革兰氏阳性致病菌及食源性病菌有抑制作用,因此有望应用在动物饲料添加剂和天然食品保鲜剂中。本研究旨从分离自酸马奶且具有抑菌特性的肠球菌BZ2的细菌素基因进行原核表达,以提高所产细菌素的量,为进一步研究抑菌特性研究,及新型微生态制剂的开发使用提供理论依据。通过利用pEASY-Blunt表达载体构建的酸马奶中的屎肠球菌BZ2(Enterococcus faecalis BZ2)所产的IIa类肠球菌素Enterocin A(entA)和IIc类肠球菌素Enterocin B(entB)的原核表达载体,并实现entA及ent B在大肠杆菌中的重组表达及蛋白纯化,并对其抑菌活性进行鉴定。首先从肠球菌BZ2(E.faecalis BZ2)细胞中提取总DNA,并以之作为模板,采用PCR的方法扩增到了entA及ent B基因,并将目的片段插入原核表达载体pEASY-blunt-E1,经过测序分析,与GeneBank登录号为EFU87997和AB292463的基因序列同源性达到100%。为了促进ent A和ent B的重组蛋白便于诱导和纯化,将两个重组原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)系统中进行表达,经Tricine-SDS-PAGE分析显示,重组蛋白His-entA和His-ent B在大肠杆菌感受态细胞中呈包涵体表达量高。利用镍柱亲和层析法从细胞裂解产物上清液中纯化His-entA和His-entB。纯化产物抑菌活性监检测结果,His-entA和His-entB均对单核细胞增生李斯特氏菌有抑制作用。