论文部分内容阅读
第一部分:肥胖大鼠急性胰腺炎时急性肺损伤模型的建立目的:拟通过高脂饲料饲养及逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠溶液建立肥胖大鼠急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）时急性肺损伤（acute lung injury,ALI）模型。方法:SPF级30只SD大鼠,体质量200-220g,随机（随机数字法）分为五组:正常组（N组,n=6）,普通饲料正常组（S-N组,n=6）,普通饲料ANP6h组（S-ANP6h组,n=6）,高脂饲料正常组（H-N组,n=6）,高脂饲料ANP6h组（H-ANP6h组,n=6）。N组大鼠购入后适应两天不做特殊处理直接剖杀取材,S-N组及S-ANP6h组采用普通饲料喂养八周,H-N组及H-ANP6h组采用高脂饲养喂养八周;S-N及H-N组饲养八周后不做任何处理,S-ANP6h组及H-ANP6h组饲养八周后逆行胆胰管注射5%的牛磺胆酸钠溶液（STC）建立AP模型。造模完成后皮下注射生理盐水（20ml/kg）补液。AP模型建立6h后剖杀大鼠取材,下腔静脉采取血液,全自动生化仪检测血清中淀粉酶（AMY）、脂肪酶（LIP）、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）的水平;大鼠胰腺、肺组织行石蜡包埋、切片,并进行HE染色,在光镜下观察胰腺、肺组织病理改变并进行病理评分。结果:喂养8周后,H组大鼠体重较S组体重明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;H组大鼠较S组腹腔内脂肪组织增多,且H-ANP6h组腹腔皂化斑较S-ANP6h组增多;H-N组大鼠血清中TG、TC水平较S-N组升高,差异均具有统计学意义（P均<0.05）;H-ANP6h组大鼠胰腺、肺组织病理损伤较H-N组明显加重,病理评分较H-N组明显升高,差异均具有统计学意义（P均<0.05）。结论:通过高脂饲料喂养联合逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠溶液可以建立肥胖大鼠急性胰腺炎急性肺损伤模型。第二部分:肥胖大鼠急性胰腺炎与非肥胖大鼠急性胰腺炎时急性肺损伤的比较目的:拟在高脂饲料喂养及普通饲料喂养8周后,通过逆行胆胰管注射5%的牛磺胆酸钠溶液建立急性胰腺炎（acute pancreatitis,ANP）大鼠模型,比较高脂饲料饲养喂养及普通饲料喂养AP时大鼠急性肺损伤（acute lung injury,ALI）的变化情况。方法:SPF级48只SD大鼠,体质量200-220g,随机（随机数字法）分为8组:普普通饲料正常组（S-N组,n=6）,普通饲料ANP3h组（S-ANP3h,n=6）,普通饲料ANP6h组（S-ANP6h,n=6）,普通饲料ANP12h组（S-ANP12h,n=6）;高脂饲料正常组（H-N组,n=6）,高脂饲料ANP3h组（H-ANP3h组,n=6）,高脂饲料ANP6h组（H-ANP6h组,n=6）,高脂饲料ANP12h组（H-ANP12h组,n=6）。S-N、H-N组分别给以普通饲料及高脂饲料喂养8周后直接处死取材;S-ANP及H-ANP各时间点（3h、6h、12h）组分别喂养8周后逆行胆胰管注射5%的牛磺胆酸钠溶液制备ANP模型,在造模后相应时间点处死大鼠取材。下腔静脉采取血液,全自动生化仪检测血清淀粉酶（AMY）、脂肪酶（LIP）、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、游离脂肪酸（FFA）的水平;留取右肺中叶计算肺组织湿干比;留取大鼠胰腺、肺组织行石蜡包埋、切片,并行HE染色,光镜下观察胰腺、肺组织病理改变并行病理评分;丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒测定血清中MDA、SOD的含量;免疫荧光法检测肺组织M1巨噬细胞（CD68+CD11c+）、中性粒细胞（髓过氧化物酶MPO）、IL-1β、IL-6、IL-10的水平;免疫组化法检测肺组织TNF-a水平。结果:同种饲料喂养的大鼠比较,S-AN12h组及H-ANP12h组大鼠胰腺、肺组织病理损伤最重,血清中MDA、肺湿干比、肺组织CD68+CD11c+、MPO水平最高,血清中SOD水平最低,差异均具有统计学意义（P均<0.05）;同一时间点相比,H-ANP组较S-ANP组大鼠胰腺、肺组织病理损伤更加严重,血清中MDA、肺组织CD68+CD11c+、MPO水平更高,血清SOD水平更低,差异均具有统计学意义（P均<0.05）。结论:肥胖可以加重急性胰腺炎时急性肺损伤的程度,可能与肥胖导致急性胰腺炎时肺组织炎性反应更加严重相关。第三部分:巨噬细胞在肥胖大鼠急性坏死性胰腺炎时急性肺损伤中的作用机制目的:拟通过建立肥胖急性胰腺炎（acute pancreatitis,ANP）模型,探讨巨噬细胞（Macrophages,m?）在肥胖急性胰腺炎时急性肺损伤（acute lung injury,ALI）中的作用及可能机制。方法:SPF级24只SD大鼠,体质量200-220g,随机（随机数字法）分为4组:高脂饲料喂养正常组（H-N组,n=6）,高脂饲料喂养假手术12h组（H-SO12h组,n=6）,高脂饲料ANP12h组（H-ANP12h组,n=6）,高脂饲料ANP12h干预组（H-ANPT12h组,n=6）。H-N组高脂饲料喂养8周后直接处死取材;H-SO12h组高脂饲料喂养8周后仅开腹后12h处死取材;ANP模型于高脂饲料喂养8周后通过逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠溶液制备;H-ANPT12h组于造模前30min经腹腔注射TLR4抑制剂（TAK-242）溶液再建立ANP模型,于ANP模型后12h处死取材。下腔静脉采取血液,全自动生化仪检测血清淀粉酶（AMY）、脂肪酶（LIP）水平;留取右肺中叶计算肺湿干比;留取胰腺、肺组织行石蜡包埋、切片,并行HE染色,光镜下观察胰腺、肺组织病理改变并进行病理评分;免疫荧光方法检测肺组织中肺表面活性蛋白A（SP-A）、肺表面活性蛋白D（SP-D）、MPO、IL-1β、IL-6、IL-10、CD68+CD11c+、CD68+CD206+、CD68+TLR4+、CD68+NLRP3+及TLR4+NLRP3+的水平;免疫组化方法检测肺组织TNF-a、NF-κB的水平;Western Bloot方法检测肺组织SP-A、SP-D水平。结果:与H-N组比较,H-ANP12h组大鼠肺病理损伤加重,肺湿干比增加,SP-A、SP-D水平降低,差异均具有统计学意义（P均<0.05）;H-ANP12h组肺组织CD68+CD11c+、CD68+TLR4+、CD68+NLRP3+、TLR4+NLRP3+及MPO、IL-1β、IL-6、TNF-a水平明显增加,差异均具有统计学意义（P均<0.05）。与H-ANP12h比较,H-ANPT12h组肺病理损伤减轻,肺湿干比降低,SP-A、SP-D水平升高,差异均具有统计学意义（P均<0.05）;H-ANPT12h组肺组织CD68+CD11c+、CD68+TLR4+、CD68+NLRP3+、TLR4+NLRP3+及MPO、IL-1β、IL-6、TNF-a水平明显减少,差异均具有统计学意义（P均<0.05）。结论:炎性因子的大量释放可导致肥胖合并急性胰腺炎时急性肺损伤,肺组织炎性因子释放的可能与肺组织中巨噬细胞内TLR4/NLRP3信号通路的活化相关。